短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质

摘要：

`目的研究短双歧杆菌(Bifidobacterium breve) α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质。方法采用硫酸铵分级沉淀及柱层析法纯化酶蛋白，垂直板状SDS-PAGE和native gradient PAGE检查蛋白纯度。结果 native gradient PAGE电泳后活性染色确定无细胞粗酶液中含有一种α-D-半乳糖苷酶，纯化后的酶蛋白是一个相对分子质量（Mr）约为156×103的双亚基蛋白质，等电点pI为5.3，最适反应温度为37℃，在40℃以下稳定，70℃时失去所有的酶活性。最适反应pH为5.5～6.5，酶在pH5.5～9.5范围内稳定。Hg+、Cu2+、Ag+(各1mmol/L)和PCMB(0.01mmol/L)强烈抑制酶活性，Co2+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+(各1mmol/L)、EDTA和DTT(各10mmol/L)对酶活性没有抑制。酶专一性水解α-D-半乳糖苷键。酶对p-硝基苯酚-α-D-半乳糖苷、m-硝基苯酚-α-D-半乳糖苷和o-硝基苯酚-α-D-半乳糖苷的Km分别为0.168mmol/L、1.07mmol/L和0.456mmol/L，Vmax分别为4.55μmol/min、0.378μmol/min和0.614μmol/min。结论 B. breve的α-D-半乳糖苷酶与少数国外报道的其他双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有相似之处，也有不同点。其Mr不同，在60℃之内的热稳定性明显较好。

关键词：双歧杆菌、α-D-半乳糖苷酶、纯化

所属期刊栏目：21

分类号：R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：山东省自然科学基金Q99D12

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：307-311