人CD40-Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达与纯化研究

摘要：

目的建立稳定表达CD40-Ig融合蛋白的工程细胞株，获得大量融合蛋白以研究靶向阻断CD40∶CD40L途径防治移植物抗宿主病（GVHD）策略的应用潜力。方法自真核瞬时表达载体pIG/40Ig中切下CD40-Fc融合基因，插入pcDNA3.1载体中构建稳定表达载体。利用脂质体Lipofectamine将该载体转染CHO细胞，G418筛选抗性克隆；夹心ELISA法检测上清中CD40-Ig融合蛋白的表达；Western blot法鉴定其免疫学活性。利用有限稀释法对筛选出的混合克隆单克隆化。滚瓶法无血清大批培养工程细胞，Protein A亲和层析法纯化，SDS-PAGE后薄层扫描分析纯度。利用流式细胞术检测该蛋白与Jurkat细胞表面CD40L的结合功能。结果 CD40-Fc融合基因插入pcDNA3.1载体后构建成功稳定表达载体p3.1/40Ig，转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达CD40-Ig融合蛋白的基因工程细胞株，命名为B2。Protein A亲和层析纯化后融合蛋白纯度达95 %以上，该融合蛋白可特异结合Jurkat细胞表面的CD40L。结论 CD40-Ig融合蛋白可模仿天然分子与其配基结合，为研究靶向CD40∶CD40L途径的治疗制剂在防治GVHD中的潜在应用提供了有用的工具。

关键词：融合蛋白、CD40-Ig、CHO细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R392

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：151-155