用PCR-SSCP方法检测念珠菌和隐球菌的实验研究

摘要：

目的:根据医学真菌大亚单位核糖体（lsu rRNA）基因的高度保守区设计广谱扩增引物，建立应用PCR-SSCP技术检测医学重要真菌的方法，并应用于临床。方法:首先用PCR技术扩增白色念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、解脂念珠菌、新型隐球菌的lsu rRNA基因，然后根据7种标准菌株DNA的单链构象多态性特征将上述医学真菌鉴定到菌种；观察引物对常见细菌和哺乳动物细胞DNA的扩增结果；于生理盐水和血液中加入念珠菌，观察方法的灵敏度；对扩增产物进行序列分析；方法建立后用于临床标本的检测。结果:不同真菌菌种的DNA具有可以区分的单链构象多态性，扩增片段长度为219～285bp，可将白色念珠菌、热带念珠菌和新型隐球菌等医学重要真菌鉴定到菌种；此引物对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌等12种常见细菌和病毒DNA扩增均为阴性结果，人血液白细胞、HeLa细胞、KB细胞、S-180细胞和3T3细胞亦无阳性DNA带出现。于生理盐水和血液中加入白色念珠菌，检测灵敏度分别为5个和10个真菌细胞。PCR产物的序列分析结果表明，白色念珠菌和新型隐球菌PCR产物的序列分析结果与基因数据库提供的序列一致，可以确证此方法的可靠性。分别用PCR-SSCP法和真菌培养法检测了46例病人的血液、尿液和脑脊液以及胸腹水标本，两种方法结果一致，而且PCR-SSCP方法的敏感性高于培养法。结论:此技术具有简便、快速、准确可靠等优点，有良好的临床应用前景。

关键词：念球菌属、隐球菌属、聚合酶链反应、单链构象多态性、核糖体

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在线出版日期：2021-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：440-444