血小板/T细胞活化抗原1（PTA1）胞膜外区基因片段的克隆及其融合蛋白的表达

摘要：

目的:克隆血小板/T细胞活化抗原1（platelet and T cell activation antigen 1，PTA1）胞膜外区基因片段，构建、表达、纯化PTA1胞膜外区与IgG Fc融合蛋白，用于PTA1配体鉴定的研究。方法:针对人PTA1 cDNA设计引物，通过反转录、半套式PCR从TPA活化的Jurkat细胞中扩增PTA1胞膜外区基因片段，并进行序列测定，而后将其进一步克隆入融合蛋白表达载体pIG中，构建重组表达载体pPTA1/Ig，经DEAE-Dextran法转染COS-7细胞后通过亲和层析纯化，融合蛋白经SDS-PAGE、夹心ELISA及Western blot鉴定。结果:获得793bp PTA1胞膜外区基因片段，构建成功PTA1/Ig融合蛋白表达载体，制备了可用于纯化PTA1/Ig的亲和层析柱，建立了检测融合蛋白的夹心ELISA方法。经SDS-PAGE、夹心ELISA及Western blot证实融合蛋白在COS-7细胞中获得表达，相对分子质量为83×10
3，表达效率约为1.3mg/L。
结论:PTA1/Ig融合表达载体构建及表达成功，获得的融合蛋白可以模拟天然的PTA1分子，为PTA1配体的鉴定提供了有力的工具。

关键词：血小板/T细胞活化抗原1、融合蛋白、基因表达

所属期刊栏目：19

分类号：R392.11;S858.28;S601

资助基金：国家自然科学基金39700065

在线出版日期：2021-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：377-381