半合成抗体库的构建及鉴定

摘要：

目的 构建半合成抗体库,不经免疫制备抗体. 方法 通过PCR法,从人胎肝DNA扩增基因组VH段基因,从Fd基因制备含有不同长度随机化CDR3的FR3-CDR3-J-CH1片段,然后用重叠PCR法构建Fd库,与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库. 结果 通过各种组合多次建库,获得总容量为4×108的半合成抗体库,其Fd段和轻链基因的重组率均大于90%,Fab表达率为50%.挑选20个克隆测定CDR3序列符合所设计的随机序列,用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体. 结论 所构建的半合成噬菌体抗体库可以用于不经免疫制备抗体.

关键词：基因文库、抗体生成、体外发生

所属期刊栏目：19

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划863-102-09-02-01;国家自然科学基金39670679;军队医药卫生科研项目96Z004

在线出版日期：2007-08-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：238-241