联合应用重组人骨保护素和阿伦膦酸钠抑制成熟破骨细胞的体外实验研究

摘要：

目的研究联合应用重组人骨保护素(rhOPG-Fc)和阿伦膦酸钠(ALN)对破骨细胞抑制作用.方法进行人类OPG-Fc融合蛋白毕赤酵母表达株的构建和鉴定.酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞,与破骨细胞前体细胞RAW264.7按照4∶1比例混合,培养于96孔板中.9 d后,重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色(TRAP染色)鉴定后,分别使用10-5 g/L rhOPG-Fc、10 μmol/L ALN、10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN、5×10-6 g/L rhOPG-Fc +5 μmol/L ALN作用于混合细胞体系,并设空白对照.加药后3、7 d观察破骨细胞数目和形态,计算单位面积内TARP阳性细胞个数,并行骨磨片吸收陷窝计数.结果重组人骨保护素(rhOPG-Fc)分子量与预期结果相符合,蛋白印迹检测(Western blotting)显示,该条带可被抗免疫球蛋白IgG抗体别显色.小鼠成骨细胞与破骨细胞前体细胞RAW264.7混合培养后9 d,体系中出现大量多核成熟破骨细胞,TARP染色证实为成熟破骨细胞.加药3、7 d后,与对照组相比,其余各组破骨细胞TARP阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数均明显减少,以10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN组减少最为显著.结论重组人骨保护素(rhOPG-Fc)可以有效减少成熟破骨细胞数目并抑制其功能.联合应用rhOPG-Fc和阿伦膦酸钠可以交互抑制成熟破骨细胞功能.

关键词：破骨细胞、体外研究、骨保护素、阿伦膦酸钠

所属期刊栏目：43

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA214081

在线出版日期：2005-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：812-816