10.3760/j:issn:0529-5815.2001.01.032
脑胶质瘤Th1/Th2类细胞因子的漂移及意义
@@ 我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了4株脑胶质瘤细胞株、52例新鲜脑胶质瘤标本和15例脑胶质瘤患者外周血标本的Th1/Th2类细胞因子的表达情况,初步探讨了脑胶质瘤Th2类细胞因子漂移的意义。
1.材料与方法:胶质瘤细胞株
SHG-44、U251、C6和9L,购自上海细胞生物研究所或本室保存。胶质瘤组织标本52例,取自我院患者,术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。术后病理:星形细胞瘤Ⅰ级4例,星形细胞瘤Ⅱ级6例,间变性星形细胞瘤23例,多形性胶质母细胞瘤9例,少突胶质细胞瘤3例,脉络丛乳头状瘤1例,室管膜瘤2例,髓母细胞瘤4例。胶质瘤患者外周血标本15例,取自术前静脉血。细胞传代收获1×106个细胞;胶质瘤组织约1 cm3大小,仔细去除坏死组织;外周血5~10 ml,肝素抗凝,Ficoll梯度离心法分离出单个核细胞;总RNA的提取采用异硫氰酸胍一步法[1]。(1)检测指标:以IFN-γ、IL-2代表Th1类因子,IL-4、IL-6、IL-10、IL-13代表Th2类细胞因子,β-actin为内参照。(2)逆转录反应:5~10 μg细胞总RNA,加入0.1 mol/L DTT 2 μl、4×dNTP 1 μl、M-MLV 1 μl (200 U)、下游引物P2 1 μl(50 pmol/L),总体积20 μl。37℃ 1 h后,95℃ 10 min灭活M-MLV。(3)PCR反应:继续加入25 mmol/L MgCl2 8 μl、4×dNTP 1 μl、上游引物P1 1 μl,总体积98 μl;95 ℃ 5 min后,加入Taq DNA聚合酶2 μl (1 U/μl) 。循环条件为94 ℃ 1 min,58℃ 1 min,72℃ 1 min,循环35次,最后72℃延长7 min。(4)1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR结果。
脑胶质瘤、细胞因子的表达、星形细胞瘤、外周血标本、逆转录聚合酶链反应、多形性胶质母细胞瘤、异硫氰酸胍一步法、瘤细胞株、少突胶质细胞瘤、脉络丛乳头状瘤、凝胶电泳鉴定、瘤组织、患者、梯度离心法、髓母细胞瘤、逆转录反应、单个核细胞、组织标本、引物、循环
39
R73(肿瘤学)
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共1页
92