单磷酸腺苷激活的蛋白激酶在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的动态变化

摘要：

目的 探讨缺氧缺血损伤后神经细胞内单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)的表达变化. 方法 以生后24 h内和7日龄新生大鼠为研究对象,采用原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation, OGD)模型及新生大鼠缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)模型,乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)法检测神经元损伤程度,噻唑蓝”3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT”检测细胞活力;于OGD及HIE损伤后不同时间点提取组织或细胞蛋白,蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,P-AMPK) /AMPK、磷酸化蛋白激酶(phosphorylated activated protein kinase,P-Akt) /Akt、Cleaved Caspase-3/Caspase-3的表达水平变化.采用Student-t检验进行统计学分析. 结果 (1)与对照组相比,OGD组LDH水平在2、4、8和24 h均明显高于对照组(P值均＜ 0.05),MTT吸光度低于对照组(P值均＜0.05).(2)与对照组比较,OGD组P-AMPK水平明显增高,OGD组P-AMPK浓度在30 min及2、4、8和24 h呈时间依赖性增加,2组上述各时间点的差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).HIE组脑组织P-AMPK表达水平明显高于对照组(HIE组l、3和7d分别为0.345±0.038、0.387±0.112和0.618±0.075,对照组为0.132±0.032),差异有统计学意义(P值均＜0.05).(3)OGD组P-Akt水平在损伤初期(30 min)高于对照组(分别为0.991±0.134与0.304±0.050),于2h达峰值(1.183±0.107),差异有统计学意义(p值均＜ 0.05),随后迅速下降至正常水平;OGD组Cleaved Caspase-3表达水平明显高于对照组,且呈时间依赖性增加(P值均＜ 0.05). 结论 缺氧缺血损伤后神经细胞内AMPK活性增高,这一趋势随暴露时间延长而更加明显.

关键词：缺氧缺血,脑、AMP活化蛋白激酶类、动物,新生、大鼠

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资助基金：第48批留学回国人员科研启动基金;湖北省自然科学基金2013CFB085;Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars48th;Natural Science Foundation of Hubei Province2013CFB085

在线出版日期：2016-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：603-607