外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1对基质金属蛋白酶-9高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

摘要：

目的 观察外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1( TIMP-1)对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,为寻找治疗糖尿病足的新方法提供实验依据.方法 应用SD大鼠皮肤成纤维细胞株CRL-1213用高糖(22 mmol/L)+高同型半胱氨酸(100 μmol/L)联合培养建立体外MMP-9高表达皮肤成纤维细胞模型,用外源性TIMP-1(100 μg/L)抑制MMP-9的活性,采用实时PCR法和ELISA法检测MMP-9基因及蛋白表达量,用明胶酶谱法检测MMP-9蛋白活性,采用流式细胞术检测细胞增殖功能、CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测细胞胶原(羟脯氨酸)分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 TIMP-1干预组大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9 mRNA和蛋白的表达量与MMP-9高表达组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但MMP-9蛋白活性受到明显抑制(1.47 ±0.13vs 0.43 ±0.13,t=12.495,P＜0.01).与对照组比较,MMP-9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[ (9.31 ±0.24)％ vs(6.54 ±0.29)％]、增殖指数[(13.8±0.5)％vs(11.3±0.6)％]、细胞活力(1.76 ±0.13 vs 1.35 ±0.12)、胶原(羟脯氨酸)分泌量[(1126±63) vs (353 ±61) μg/L]、6h横向迁移率[(38.7±2.6)％vs(21.3±2.1)％]和纵向迁移细胞数(91 ±4 vs 71 ±4)均明显减少(t=16.433、7.328、5.113、19.847、11.529、8.124,均P＜0.05)；TIMP-1干预后,大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[(6.54±0.29)％vs(7.75±0.27)％]、增殖指数[(11.3±0.6)％vs(12.5±0.5)％]、细胞活力(1.35 ±0.12 vs 1.64 ±0.14)、胶原(羟脯氨酸)分泌量[(353 ±61) vs (829 ±59)μg/L]、6h横向迁移率[(21.3±2.1)％vs(31.5±2.7)％]和纵向迁移细胞数(71 ±4 vs 85 ±4)与MMP-9高表达组比较得到明显改善[t =6.881、3.292、3.615、12.590、6.644、6.015,均P＜0.05].结论 MMP-9高表达大鼠皮肤成纤维细胞的生物学行为受到抑制,外源性TIMP-1能够减缓这种抑制作用.

关键词：基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1、糖尿病足、大鼠

所属期刊栏目：04

分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金81070660;广东省科技计划基金2008A030201012;2009B091300128

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：115-119