咖啡酸苯乙酯通过激活核因子E2相关因子2/血红素氧合酶1通路减轻氧化应激损伤改善腹膜透析相关性腹膜纤维化

摘要：

目的:探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester，CAPE）是否通过激活核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）/血红素氧合酶1（heme oxygenase-1，HO-1）信号通路减轻氧化应激损伤，从而改善腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）相关性腹膜纤维化。方法:按随机数字表法将32只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组：对照组（CON组，0.9%生理盐水20 ml/d腹腔注射）、单独CAPE组（CAPE组，0.9%生理盐水20 ml/d+CAPE 10 mg·kg
-1·d
-1腹腔注射）、模型组［PD组，4.25%葡萄糖腹膜透析液（peritoneal dialysis fluid，PDF）20 ml/d腹腔注射，并于第1、3、5及7天予脂多糖0.6 mg/kg腹腔注射］及CAPE干预组（PD+CAPE组，在PD组基础上予CAPE 10 mg·kg
-1·d
-1腹腔注射），每组8只。腹腔注射持续28 d，第28天行腹膜平衡试验检测腹膜转运功能后处死大鼠，收集壁层腹膜和网膜组织进行后续检测。为进一步探讨机制，分离培养原代大鼠腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelial cells，PMCs），用2.5%葡萄糖PDF刺激PMCs，加5 μmol/L CAPE干预，检测PMCs的形态和功能。应用Nrf2特异性抑制剂ML385阻断Nrf2探讨CAPE对PMCs保护作用与Nrf2/HO-1通路的关系。组织病理染色检测腹膜组织的结构变化，免疫组化分析Cleaved caspase-3、Bax、α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）及Ⅰ型胶原蛋白（typeⅠcollagen，Col-Ⅰ）的蛋白表达，Western印迹检测α-SMA、FN、转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）、HO-1及细胞核内Nrf2（N-Nrf2）的蛋白表达量，细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况，流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）表达，丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检测试剂盒分别检测MDA含量和SOD活性，细胞免疫荧光分析Nrf2蛋白的表达。
结果:与CON组相比，PD组大鼠腹膜较厚，凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、间皮下α-SMA、FN、Col-Ⅰ蛋白表达及MDA含量均较高，HO-1、N-Nrf2蛋白表达和SOD活性均较低（均
P<0.05）；与PD组相比，PD+CAPE组大鼠腹膜形态明显改善，Cleaved caspase-3、Bax、α-SMA、FN、Col-Ⅰ蛋白表达及MDA含量均较低，HO-1、N-Nrf2蛋白表达和SOD活性均较高（均
P<0.05）。与CON组相比，PD组大鼠超滤量较低，腹膜通透性较高，CAPE干预后大鼠腹膜转运功能显著改善（均
P<0.05）。在体外培养的PMCs中，PDF抑制Nrf2核转位和HO-1蛋白表达，上调细胞内ROS水平，诱导细胞凋亡增多和α-SMA、TGF-β1和FN蛋白表达增加（均
P<0.05）；CAPE可激活Nrf2核转位，增加HO-1蛋白表达，下调细胞内ROS水平，部分逆转PDF诱导的细胞凋亡及上皮-间充质转化（均
P<0.05）；CAPE对PMCs的保护作用可部分被ML385抵消（均
P<0.05）。
结论:CAPE可减轻PD对腹膜的氧化应激损伤，减少PMCs凋亡和上皮-间充质转化，改善腹膜纤维化及超滤功能。CAPE对腹膜的保护作用与激活Nrf2/HO-1通路有关。

关键词：腹膜透析、腹膜纤维化、氧化性应激、凋亡、上皮-间充质转化、核因子E2相关因子2/血红素氧合酶1

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资助基金：苏州市科技计划项目SYS2019071，SYS2020132;苏州市科教兴卫项目KJXW2020017;Science and Technology Project of SuzhouSYS2019071, SYS2020132;Key Talent's Subsidy Project in Science and Education of SuzhouKJXW2020017

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：446-455