3-甲基腺嘌呤在尿酸诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用

摘要：

目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）在尿酸（uric acid）诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法:（1）24只SD大鼠被随机分为4组：正常对照组、3-MA干预组、高尿酸血症肾病（hyperuricemic nephropathy，HN）模型组、HN+3-MA干预组，每组6只。根据大鼠体重，用蒸馏水将腺嘌呤（100 mg/kg）和氧嗪酸钾（1 500 mg/kg）混合制成混悬液，每天灌胃制备HN大鼠模型，对照组及3-MA干预组予等体积蒸馏水灌胃。3-MA干预组及HN+3-MA干预组在造模同时每天予3-MA（15 mg/kg）腹腔注射，对照组及HN组予等体积生理盐水腹腔注射，连续21 d。采用原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay，TUNEL）观察肾脏细胞凋亡，通过Western印迹法检测活化型caspase-3（cleaved caspase-3）和Bax的表达水平，免疫荧光染色检测肾组织cleaved caspase-3的表达定位情况。（2）用高尿酸（800 μmol/L）刺激人肾小管上皮细胞（HK-2），分别用不同浓度的3-MA或转染Beclin-1小干扰RNA（small interfere RNA，siRNA）干预细胞，采用Western印迹及免疫荧光染色检测肾小管上皮细胞的凋亡情况。结果:与正常对照组相比，HN模型组大鼠肾小管上皮细胞凋亡明显上调（
P<0.01），凋亡相关标志物cleaved caspase-3和Bax表达水平显著上调（均
P<0.05）。与HN模型组相比，HN+3-MA干预组大鼠肾小管上皮细胞凋亡明显下调（
P<0.01）。此外，高尿酸可诱导体外培养的HK-2细胞凋亡相关蛋白表达明显增加（均
P<0.05），而使用不同浓度的3-MA或转染Beclin-1小干扰RNA可明显降低cleaved caspase-3和Bax的表达水平（均
P<0.05）。
结论:自噬在尿酸诱导的肾小管上皮细胞凋亡中起重要作用，抑制自噬过度激活可能是防治HN进展的新策略。

关键词：自噬、尿酸、细胞凋亡、高尿酸血症肾病、肾小管上皮细胞、3-甲基腺嘌呤

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资助基金：国家自然科学基金82070791;上海市浦东新区卫生系统领先人才培养计划PWRl2021-02;上海市科委基金20ZR1445800;上海市浦东新区卫健委项目PW2021D-04;上海市综合医院中西医结合专项ZHYY-ZXYJHZX-202114;National Nature Science Foundation of China82070791;Outstanding Leaders Training Program of Pudong Health Bureau of ShanghaiPWR12021-02;Shanghai Scientific Committee of China20ZR1445800;Project of Pudong Health Bureau of ShanghaiPW2021D-04;Shanghai Health Bureau and Shanghai Administration of Traditional Chinese Medicine of ChinaZHYY-ZXYJHZX-202114

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：820-826