富含半胱氨酸蛋白61对转化生长因子β1活化肾脏成纤维细胞的抑制作用及机制

摘要：

目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)在转化生长因子β1(TGF-β1)活化的肾成纤维细胞(NRK-49F)中的表达,探索Cyr61的作用及可能机制.方法 (1)0.0、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/L TGF-β1刺激活化NRK-49F细胞,Western印迹检测细胞Cyr61蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖活性.(2)质粒转染构建过表达及低表达Cyr61的NRK-49F细胞,分为对照组(转染空质粒组)、过表达组和低表达组.CCK-8法检测3组细胞培养24、48、72 h的增殖活性.5.0 μg/L TGF-β1诱导活化3组细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期,实时荧光定量PCR检测纤维化标志物(Col1α1、Co13α1、MMP9、MMP13)、细胞衰老信号通路分子(p53、p21、Rb、p16)的mRNA表达,Western印迹检测Col3、MMP9蛋白的表达.结果 (1)与0.0 μg/L TGF-β1组比较,0.5、1.0、2.0、5.0 μg/L TGF-β1组NRK-49F细胞的增殖活性均增加(均P＜ 0.05),1.0 μg/L组Cyr61蛋白表达降低,5.0 μg/L组Cyr61蛋白表达升高(均P＜0.05).(2)Cyr61过表达组NRK-49F细胞24、48、72 h的增殖活性均低于对照组(均P＜0.05),且呈时间依赖性.(3)TGF-β1刺激后,与对照组比较,Cyr61过表达组NRK-49F细胞增殖活性降低,促纤维化因子Col1α1和Col3α1表达减少,同时抗纤维化因子MMP9和MMP13的表达增加,周期停滞在G1期的细胞比例增加,细胞衰老信号通路基因p53、p21和Rb mRNA表达增加 (均P＜ 0.05),而Cyr61低表达组上述效应正好相反(均P＜0.05);3组细胞p16基因mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Cyr61抑制肾成纤维细胞增殖及纤维化表型分泌,从而减缓肾脏纤维化进程,p53/p21/Rb细胞衰老信号通路可能参与Cyr61的抑纤维化作用.

关键词：成纤维细胞、纤维化、衰老、胞间信号肽类和蛋白质类、富含半胱氨酸蛋白61

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分类号：R73;R69

资助基金：国家自然科学基金面上项目81170688、81470973;山东省自然科学基金ZR2011HM053National Natural Science Foundation of China81170688,81470973;Natural Science Foundation of Shandong ProvinceZR2011HM053

在线出版日期：2017-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：704-710