Klotho减轻硫酸吲哚酚诱导的血管内皮细胞损伤及其机制

摘要：

目的 观察klotho蛋白对硫酸吲哚酚(IS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用,并探讨内质网应激是否参与此过程中及可能机制.方法 (1)体外培养人脐静脉内皮细胞,分别以5、25、50 mg/L IS干预细胞48 h,以50 mg/L IS干预细胞12、24、48 h,CCK-8法测定细胞活性,观察IS对细胞活性的影响.(2) 50 mg/L IS处理细胞48 h,同时给予0、1、10、100 μg/Lklotho蛋白干预,CCK-8测定细胞活性,观察不同浓度klotho蛋白对IS毒性的影响.(3)细胞分为对照组、IS组(50 mg/L IS)、klotho组(50 mg/L IS+100 μg/L klotho)和磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路抑制剂Compound C组(50 mg/L IS+100 μg/L klotho+10 μmol/L Compound C)干预48 h,CCK-8测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR、Western印迹分别检测糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA和蛋白表达,Western印迹检测磷酸化AMPK表达.结果 IS以时间依赖性和浓度依赖性的方式抑制细胞活性.50 mg/L IS组细胞活性低于对照组(P＜0.05).klotho蛋白可部分恢复IS抑制的细胞活性且呈浓度依赖.100 μg/L klotho组细胞活性高于IS组(P＜0.05).与对照组比较,IS组GRP78、CHOP表达上调,细胞凋亡率增加,磷酸化AMPK降低(均P＜0.05);与IS组比较,klotho组GRP78、CHOP表达降低,细胞凋亡率降低,磷酸化AMPK上调(均P＜0.05).klotho蛋白的作用可被Compound C阻断,上述指标Compound C组与klotho组差异均有统计学意义.结论 IS对人脐静脉内皮细胞具有毒性作用,可抑制细胞活性,诱导内质网应激及细胞凋亡;klotho蛋白可部分拮抗IS对内皮细胞的毒性作用,其机制可能与活化AMPK通路和降低内质网应激相关的细胞凋亡有关.

关键词：硫酸吲哚酚、内质网应激、磷酸腺苷酸活化蛋白激酶、klotho蛋白

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分类号：R3 ;R96

资助基金：江苏省教育厅六大人才高峰项目WSN-056;江苏省临床医学科技专项BL2014080;扬州大学附属医院院级课题 Six Talent Peaks Project in Jiangsu ProvinceWSN-056;Special Foundation for Clinical Science and Technology of Jiangsu ProvinceBL2014080;Key Subject of Hospital-level of the Affiliated Hospital of Yangzhou University

在线出版日期：2017-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：698-703