高糖和血管紧张素Ⅱ对人肾小管上皮细胞Toll样受体4信号表达及炎性和纤维化因子的影响

摘要：

目的 通过研究高糖和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)环境下人肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达及其相关的炎性和纤维化因子的变化及TLR4 siRNA的干扰作用,从天然免疫角度探讨糖尿病肾病(DN)发病机制和靶向干预措施.方法 设计并合成3对针对人TLR4基因的特异性siRNA片段,以带有红色荧光的BLOCK-IT Alexa Fluor作为阴性对照,荧光显微镜下观察细胞转染效率,实时定量PCR检测TLR4 mRNA的表达变化.确定TLR4 siRNA基因沉默效果较佳后再进一步实验.实验分2部分进行,第1部分细胞分3组:正常糖对照组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(M,5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)和高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖),初步验证高糖、高渗的影响.第2部分7组:NG组、HG组、AngⅡ(10-7 mmol/L)组、AngⅡ+空载体对照组、HG+空载体对照组、AngⅡ+TLR4 siRNA转染组及HG+TLR4 siRNA转染组.采用实时定量PCR法检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、热休克蛋白47(HSP47) mRNA的表达;Western印迹法检测TLR4、MyD88、HSP47、核因子κB(NF-κB)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的蛋白表达;ELISA法检测细胞上清液单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)的水平.结果 与NG组比较,甘露醇组TLR4、MyD88蛋白表达差异均无统计学意义(P＞ 0.05);HG、AngⅡ组TLR4、MyD88、HSP47 mRNA及TLR4、MyD88、NF-κB、HSP47、ColⅣ蛋白表达均显著上调(P＜0.01),细胞上清液MCP-1、IL-6水平亦升高(P＜0.01);TLR4siRNA转染后,与HG组或AngⅡ组相比上述指标均显著下调(P＜0.01);空载体转染后,与HG组或AngⅡ组相比上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高糖或血管紧张素Ⅱ均刺激人肾小管上皮细胞TLR4信号并引起天然免疫应答,导致炎性和纤维化因子上调.特异性基因沉默可通过阻断由高糖或AngⅡ诱导的TLR4信号,下调炎性及纤维化因子释放.TLR4信号可能是高糖或高肾素环境下人肾小管上皮细胞天然免疫应答的共同关键通路.

关键词：血管紧张素Ⅱ、Toll样受体4、葡萄糖、肾小管上皮细胞、天然免疫应答

所属期刊栏目：32

分类号：R734.2;R5;R363

在线出版日期：2016-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：43-49