10.3760/cma.j.issn.1001-7097.2013.10.008
经肾动脉移植脂肪干细胞对大鼠急性缺血性肾损伤的治疗作用
目的 探讨经大鼠左侧肾动脉移植脂肪干细胞(ASCs)对急性缺血性肾损伤(iAKI)的治疗作用,同时观察ASCs的体内分布情况.方法 采用胶原酶消化法分离培养ASCs并鉴定.夹闭SD大鼠双侧肾蒂45 min建立iAKI模型.按随机数字表法分成两组:对照组(再灌注后即刻经左肾动脉注射500μl PBS,n=30)和ASCs治疗组(再灌注后即刻经肾动脉移植5× 105 ASCs,n=30).术后12、24、48、72 h和1周时处死大鼠,测定血清肌酐值(Scr),光学显微镜观察肾脏病理损伤及细胞凋亡、炎性反应及细胞增生情况,荧光显微镜观察ASCs在肾、肺、肝、脾、心脏的停留时间及分布情况.结果 培养的第3代ASCs具有成脂、成骨等多向分化潜能,流式细胞仪检测高表达CD29 (99.35%)和CD90 (92.88%),低表达CD34(0.48%)和CD45 (3.51%).ASCs治疗组Scr水平各时间点均显著低于对照组(均P<0.05).与对照组相比,治疗组左侧肾小管间质损伤评分在再灌注12、24、48 h时显著降低(均P<0.05);肾组织TUNEL染色和巨噬细胞浸润染色积分在再灌注12、24、48、72 h和1周时显著降低(均P<0.05);核增殖抗原在再灌注48 h时显著增加(P<0.05),72 h和1周时显著减少(均P<0.05).与治疗组右肾相比,治疗组左侧肾小管间质损伤评分在再灌注24 h时显著降低(P<0.05);肾组织TUNEL染色阳性细胞数在再灌注1周时减少(P<0.05);巨噬细胞浸润染色积分在再灌注12、48、72 h和1周时减少(均P<0.05);核增殖抗原48 h时增加(P<0.05),72 h和1周时减少(均P< 0.05).荧光显微镜观察显示ASCs在肾脏内停留时间超过1周,但移植48 h后明显减少,肺、肝、脾、心脏仅观察到极少量的Dil阳性细胞.结论 ASCs经肾动脉移植可显著改善iAKI大鼠肾功能、减轻肾脏病理损伤和细胞凋亡、减少炎性细胞浸润、促进损伤后修复,这可能与经肾动脉移植可提高ASCs进入损伤肾脏的数量,减少循环过程中的其他器官截留效应有关.
干细胞移植、再灌注损伤、细胞增殖、细胞凋亡、急性肾损伤
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R692.6;R725.7;R285.5
国家自然科学基金;上海市科委基础研究重大项目;国家科技支撑计划
2014-01-10(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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