激活环磷酸腺苷/蛋白激酶信号对药物诱导足细胞损伤的影响

摘要：

目的 研究激活环磷酸腺苷(cAMP)信号对药物诱导的足细胞损伤的影响.方法 8周龄雄性BalB/C小鼠被随机分为对照组、阿霉素(ADR)组和腺苷酸环化酶激动剂(Forskolin) +ADR组,采用ADR尾静脉注射的方法制备肾病模型,Forskolin+ADR组小鼠给予腹腔内注射Forskolin.用免疫荧光激光共聚焦法检测小鼠肾组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平,透射电子显微镜观察足细胞形态改变,免疫组织化学法检测肾小球WT-1的表达.分别用嘌呤霉素氨基核苷(PAN),环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白(Epac)信号激动剂8-pCPT-2-O-Me-cAMP (2Me),蛋白激酶A(PKA)信号激动剂pCPT-cAMP(pCPT)及其阻断剂H89处理条件永生化的足细胞,Western印迹法检测足细胞Epac、caspase 3及cleavedcaspase 3的表达水平,蛋白激酶检测系统检测足细胞PKA活性,CCK-8试剂盒法检测足细胞毒性,TUNEL法检测足细胞凋亡,JC-1染色法检测线粒体膜电位.结果 (1)与ADR组比较,Forskolin+ADR组小鼠尿白蛋白排泄量减少(P＜0.05),肾小球WT-1阳性细胞数增加(P＜0.05).(2)PAN刺激可致足细胞数量减少,作用呈时间依赖性(均P＜0.05);pCPT可减轻PAN诱导的足细胞数量减少(P＜ 0.05);PKA信号抑制剂H89有阻断pCPT的作用,并呈剂量依赖性(均P＜ 0.05).(3)对照组,PAN组和pCPT+PAN组绿色荧光细胞数所占比率分别是(12.67±2.15)％,(31.35±4.60)％和(16.96±2.51)％,P＜ 0.05.H89预处理有阻断pCPT的作用(P＜0.05).(4)PAN刺激足细胞凋亡细胞数和cleaved caspase3表达水平较对照组显著升高(均P＜0.05),pCPT预处理后足细胞凋亡细胞数和cleaved caspase3表达水平较PAN组显著下降(均P＜ 0.05).结论 激活cAMP信号可减轻ADR肾病小鼠足细胞损伤及PAN诱导的足细胞凋亡,cAMP/PKA信号通路可能介导了cAMP对药物诱导足细胞损伤的保护作用.

关键词：足细胞、凋亡、环磷酸腺苷、蛋白激酶A、环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白

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资助基金：国家自然科学基金30971363,81270781;上海市自然科学基金08ZR1413200

在线出版日期：2014-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：754-760