红细胞生成素对模拟急性肾损伤微环境下培养骨髓间充质干细胞增殖的影响及机制探讨

摘要：

目的 观察经红细胞生成素(EPO)干预后,体外模拟急性肾损伤(AKI)微环境下培养骨髓间充质干细胞(MSC)的分裂增殖情况,并探讨产生这种变化的可能机制.方法 抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出小鼠MSC(mMSC),以流式细胞仪鉴定.夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30 min再开放30 min的方法制作AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作缺血再灌注(IR)肾脏匀浆上清.取扩增第3代的mMSC分组培养:A组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;B组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基+IR肾脏匀浆上清,体外模拟AKI微环境干预mMSC;C组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基+IR肾脏匀浆上清+不同浓度EPO(1、5、10、50 U/ml).培养1、3、5、7 d.CCK-8法检测各组培养mMSC的增殖,TUNEL法检测mMSC凋亡,Western印迹法检测mMSC表面EPO受体(EPOR)及增殖凋亡相关信号通路蛋白的表达.结果 CCK-8法检测显示,经IR肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSC的增殖效应显著减弱(P＜0.01),而TUNEL检测表明其胞核染色阳性细胞的百分比显著高于A组(P＜0.01);给予EPO干预后,mMSC的增殖能力增强,胞核染色阳性细胞百分比降低,具有浓度依赖效应.Western印迹结果显示,第3代mMSC表面存在EPOR表达,培养5 d后EPOR相对表达量为0.092±0.015.EPO以剂量和时间依赖性降低AKI微环境下凋亡相关蛋白caspase-3的表达,同时上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达.用10 U/ml EPO干预5 d后,相对于B组,磷酸化蛋白酪氨酸激酶2及磷酸化信号转导和转录因子的表达均显著上调(均P＜0.01).结论 EPO能促进体外AKI微环境干预下培养mMSC的增殖,减轻其凋亡,该效应经EPOR介导,并与增殖凋亡相关信号通路蛋白有关.

关键词：红细胞生成素、间质干细胞移植、细胞增殖、细胞凋亡、急性肾损伤

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分类号：R6(外科学)

资助基金：南京军区122工程学科带头人培养基金;南京军区医药卫生基金07M023;南京军区科技创新重点项目基金09Z006;上海市卫生局科研课题青年基金2009Y119

在线出版日期：2011-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：112-117