S期激酶相关蛋白2调控大鼠系膜细胞增殖

摘要：

目的 探讨S期激酶相关蛋白 2(Skp2)表达变化对系膜细胞增殖的影响.方法 设计合成大鼠Skp2 siRNA和对照siRNA、pIRES-GFP-Skp2质粒和pIRES-GFP质粒.采用脂质体转染法进行细胞转染.半定量PCR和Western印迹法检测Skp2的mRNA、蛋白表达.原代培养的大鼠系膜细胞以每孔3000个接种于96孔板,分为以下6组:(1)无血清组;(2)20%胎牛血清(FCS)组;(3)10%FCS+pIRES-GFP质粒转染组;(4)10%FCS+pIRES-GFP-Skp2质粒转染组;(5)20%FCS+对照siRNA组;(6)20%FCS+Skp2 siRNA组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞相对活力和相对细胞数;BrdU标记法检测S期细胞;流式细胞仪检测细胞周期.结果 半定量PCR法结果显示,与阴性对照siRNA组相比,Skp2 siRNA转染后Skp2 mRNA表达显著下调.Western印迹结果显示,与pIRES-GFP质粒转染组相比,pIRES-GFP-Skp2质粒转染后Skp2蛋白表达显著上调.MTT、BrdU和细胞周期分析显示,与相应对照组相比,Skp2质粒转染后相对细胞数增加(A值:0.419±0.088比0.305±0.036,P＜0.01)、S期细胞数增多(BrdU阳性细胞:0.21±0.04比0.15±0.03,P＜0.01;S期细胞数:20.18±0.64比14.33±0.37,P＜0.01);Skp2 siRNA转染后相对细胞数减少(A值:0.328±0.069比0.482±0.133,P＜0.01);S期细胞数减少(BrdU阳性细胞:0.17±0.01比0.24±0.00,P＜0.01;S期细胞数:16.52±0.75比23.81±1.25,P＜0.01).结论 Skp2过表达促进系膜细胞增殖,下调Skp2表达可抑制系膜细胞增殖.

关键词：肾小球系膜细胞、细胞周期蛋白类、S期激酶相关蛋白质类、细胞增殖

所属期刊栏目：27

分类号：R6(外科学)

资助基金：大连市科技局优秀青年科技人才基金2008J23JH034

在线出版日期：2011-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：41-45