ADMA-DDAH路径在尿酸引起血管内皮损伤中的作用

摘要：

目的 观察可溶性尿酸(UA)直接作用于血管内皮细胞后,对不对称二甲基精氨酸(ADMA)生成和二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH-2)表达的影响,探讨ADMA-DDAH路径在尿酸引起的血管内皮损伤中的作用.方法 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在含不同浓度UA(0、60、120 mg/L)的培养液孵育下,选取6 h和24 h为研究时间点,应用ELISA法和高压液相质谱分析(HPLC)技术检测细胞上清液中ADMA的浓度;应用RT-PCR、免疫荧光(IF)和蛋白印迹法(WB)检测内皮细胞DDAH-2的表达;应用流式细胞技术检测细胞内2',7'-二氯荧光素(DCF)的荧光强度,用以评估内皮细胞活性氧簇(ROS)的生成.分别收集并检测经UA(0、60、120 mg/L)单独刺激和与干预剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)(UA 120 mg/L+NAC 10 mmol/L)共孵育24 h后各组细胞内的DDAH-2蛋白水平,并将其与ADMA标准品在37℃共孵育2 h,根据ADMA的降解量,间接评估不同浓度尿酸作用对内皮细胞DDAH-2蛋白活性的影响.结果 UA以浓度依赖的方式上调ADMA的表达,并且在相同浓度下,刺激24 h比6 h更显著地上调ADMA的表达(均P＜0.05).UA浓度、作用时间的改变对细胞内DDAH-2表达的影响无明显差异(均P＞0.05).高UA组作用24 h后细胞内ROS生成比低UA组增多(P＜0.05),DDAH-2活性降低(P＜0.05),此效应可被NAC的干预所阻断.结论 高浓度UA可促进内皮细胞ROS生成,从而导致DDAH-2活性的降低和ADMA降解的减少,而干预内皮细胞NO的合成.据此推论,高尿酸损伤内皮细胞可能有DDAH-ADMA轴的参与.

关键词：尿酸、内皮损伤、不对称二甲基精氨酸、二甲基精氨酸二甲胺水解酶、活性氧簇

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分类号：R6(外科学)

在线出版日期：2011-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：17-22