重组人红细胞生成素预处理对肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中PI3K-Akt-GSK-3β通路的调控作用

摘要：

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)-蛋白激酶B(Akt)-糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注(IR)损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组:正常对照组、IR组、LY294002干预组(P13K-Akt阻断剂,10 μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂,20μmol/L)、rHuEPO干预组(20 U/L)、rHuEPO+LY294002干预组、rHuEPO+LiCl干预组.Westem印迹法榆测Akt(Ser473)、GSK-3β(Set9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)活性;MTT法检测细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡.结果 IR损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调(15.20%±1.43%)、Akt活性水平下降、GSK-3β及caspase-3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).与IR组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调(18.20%+2.06%)、Akt活性水平下调、GSK-3β及caspase-3酶活性上调,LiCl干预使细胞凋亡率下调(12.30%±0.85%)、Akt活性水平上调、GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异均有统计学意义(P<0.05). rHuEPO干预与IR组相比,细胞凋亡率下降(11.10%±1.62%)、Akt活性水平升高而GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异有统计学意义(P<0.05).与rHuEPO干预相比,rHuEPO+LY294002双干预细胞凋亡率升高(13.40%±1.94%)、Akt活性水平下降而 GSK-3β及caspase-3酶活性上调,rHuEPO+LiCI双干预细胞凋亡率下调(7.50%±1.31%)、Akt活性水平上升而GSK-3β及caspase-3酶活性下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IR损伤可引起肾小管卜皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响caspase-3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及caspase-3酶活性,从而减轻细胞凋亡,对HK-2 IR损伤有一定的保护作用.

关键词：红细胞生成素、重组、再灌注损伤、细胞凋亡、1-磷脂酰肌醇3-激酶、糖原合成酶激酶3、肾小管上皮细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R6(外科学)

资助基金：2007年湖北省自然科学基金面上项目2007ABA290

在线出版日期：2010-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：603-608