Gpxl-Klkl转基因对肾缺血再灌注损伤保护作用的研究

摘要：

目的 制备人谷胱甘肽过氧化物酶(Gpxl)、组织激肽释放酶(Klkl)共转基因小鼠,在此基础上制作.肾缺血再灌注损伤小鼠模型.观察转基因小鼠对缺血再灌注损伤的耐受能力.在体研究Gpxl-Klkl转基因对肾缺血再灌注的保护作用.方法 应用基因工程技术制备pKsp-Gpxl-IRES-Klkl质粒,酶切后回收转基因片段并纯化,通过外源基因受精卵雄原核显微注射法制备Gpxl-Klkl共转基因小鼠.采用丝线悬吊控制法制备转基因小鼠肾缺血再灌注模型.设立C57BL野生型小鼠同法制备的肾缺血再灌注损伤为对照.在肾缺血再灌注实验前后,测定血尿素氮、血肌酐、肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总一氧化氮合酶(tNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS).留取肾脏组织制备病理切片,观察Gpxl-Klkl转基因小鼠抗肾缺血再灌注损伤的能力.结果 获得全长为6.585 kb的pKsp-Gpxl-IRES-Klkl重组质粒,并证明了该克隆的正确性.在转基因小鼠制备过程中,共获得525枚注射卵,移植成功率为81.0%,小鼠出生总数109只.经基因组DNA的PCR检测,确认10只为转基因阳性小鼠,阳性率为9.2%.Western印迹法检测证实了阳性转基因小鼠肾脏组织有Gpxl和Klkl蛋白强表达.转基因小鼠(实验组)和野生型小鼠(对照组)肾缺血再灌注损伤模型建立后,实验组血样中尿素氮及肌酐水平显著低于对照组(P<0.01);肾脏组织中SOD显著高于对照组(P<0.01),MDA显著低于对照组(P<0.01);两组肾组织中tNOS较缺血再灌注前均显著升高.且实验组显著高于对照组(P=0.025),实验组肾组织中iNOS显著低于对照组(P<0.01).缺血再灌注后,实验组肾组织间质轻度水肿,肾小管上皮坏死细胞较少,对标本损伤程度采用半定量评分后显示,实验组损伤程度显著轻于对照组(1.58±1.05比3.95±0.80,P<0.05).结论 成功制备Gpxl-Klkl转基因小鼠.Gpxl-Klkl过表达对肾缺血再灌注损伤的保护作用.

关键词：再灌注损伤、谷胱甘肽过氧化酶、组织激肽释放酶类、小鼠、转基因

所属期刊栏目：26

分类号：R6(外科学)

在线出版日期：2010-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：290-294