肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1在马兜铃酸Ⅰ跨细胞转运及其在细胞毒性中的作用

摘要：

目的 探讨肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1(OAT1)在马兜铃酸Ⅰ(AA Ⅰ)跨细胞转运中的作用及其毒效关系.方法 体外构建重组大鼠OAT1(rOAT1)基因的真核表达质粒,将含rOAT1质粒导入人胚肾细胞(HEK-293).观察rOAT1及被其特异性底物对氨基马尿酸(PAH)阻断后对AA Ⅰ摄取的作用.并分别观察不同浓度AA Ⅰ对转染细胞caspase-3mRNA表达和细胞凋亡的影响.Western印迹检测转染细胞rOAT1表达;毛细管电泳法检测细胞内PAH浓度;高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内AA浓度.RT-PCR检测细胞caspase-3mRNA表达;流式细胞法(Annexin V-FITC)检测细胞凋亡水平.结果 转染rOAT1质粒的HEK-293细胞特异性表达rOAT1.以40、80、120、160 mg/L AA Ⅰ分别刺激细胞45 min,转染rOAT1组细胞内AA Ⅰ浓度显著高于空载体组(均P<0.05).以120 mg/LAAⅠ分别刺激细胞30、60、90、120 min,转染组细胞AA Ⅰ浓度显著高于空载体组(均P<0.05).加入PAH(5 mmol/L)特异性阻断OAT1 35 min后,以上述不同浓度AA Ⅰ分别刺激转染细胞,细胞内AA Ⅰ浓度显著低于未阻断组(均P<0.05).以上述不同浓度AA Ⅰ分别刺激转染细胞和空载体细胞,两组细胞caspase-3 mRNA表达及细胞凋亡随AA Ⅰ浓度上升而增加,转染组细胞凋亡率显著高于空载体组(均P<0.05).结论 转染含rOAT1质粒的HEK-293细胞表达rOAT1.AA Ⅰ呈浓度依赖性和时间依赖性进入rOAT1转染细胞,并呈剂量依赖性诱导OAT1表达细胞凋亡.提示OAT1介导AA Ⅰ的肾细胞转运及细胞毒性.

关键词：有机阴离子转运蛋白1、马兜铃酸、细胞凋亡、转染、肾毒性

所属期刊栏目：25

分类号：R6(外科学)

资助基金：国家自然科学基金30873432

在线出版日期：2009-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：624-629