G肽对血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞转化生长因子β1活化的影响

摘要：

目的观察根据血小板反应蛋白1(TSP1)分子WSHW序列人工合成的六肽(GGWSHW,G肽)对由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化的抑制作用.方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),以未处理HK-2细胞为正常对照,以AII刺激HK-2细胞(AngⅡ组),选择合成TSP1和TGF-β1最佳刺激浓度和时间.刺激前加入10μmol/L G肽进行干预(G肽组),并以AngⅡ受体阻断剂洛沙坦(losartan)为抑制对照(losartan组).分别用RT-PCR和Western印迹检测TSP1和TGF-β1以及细胞外基质纤连蛋白(FN)和纤溶酶原活化物抑制剂-1(PAI-1)mRNA转录和蛋白表达.共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TSP1和TGF-β1的表达以及两者共表达.ELISA法检测培养细胞上清液中活性TGF-β1、总TGF-β1、FN和PAI-1的分泌含量.Western印迹检测TGF-β1信号转导蛋白Smad2及磷酸化Smad2(p-Smad2)表达水平.结果AngⅡ以时间和剂量依赖方式促进HK-2细胞合成TSP1和TGF-β1(优化后分别为6 h的1 μmol/L,12 h的0.1 μmol/L).与正常对照组比较,AngⅡ组TSP1与TGF-β1阳性共表达的细胞数上调5.4倍;总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别增加1.8和2.0倍;p-Smad2蛋白水平明显上调;FN和PAI-1 mRNA转录水平分别上调3和1.5倍,且细胞上清液中两者含量分别增加2和1.9倍.G肽对TSP1和TGF-β1 mRNA转录和蛋白表达水平均无显著性影响,且对总TGF-β1分泌无明显抑制作用,但可显著抑制活性TGF-β1的水平.此外与losartan组比较,G肽组p-Smad2蛋白表达减少28.9%,FN和PAI-1mRNA转录水平分别下调34.5%和26%,且细胞上清液中两者含量分别减少11%和8.9%.结论TSP1肽抑制物体外能通过有效竞争抑制TSP1致HK-2细胞的TGF-β1活化作用,并可相应下调FN和PAI-1的合成分泌.

关键词：转化生长因子β、血管紧张素Ⅱ、凝血酶敏感蛋白1、HK-2细胞

所属期刊栏目：22

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30270613;上海市重点学科建设项目T0201;上海市卫生局资助项目05Ⅲ001;上海市卫生局重点项目2003ZD002

在线出版日期：2006-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：353-359