细胞壁锚定蛋白SasX调控RNAⅢ参与金黄色葡萄球菌ST239克隆生物膜形成及致病性相关研究

摘要：

目的:探讨金黄色葡萄球菌（SA）细胞壁锚定蛋白SasX对RNAⅢ转录表达的调控，揭示其对SA的生物膜（BF）形成和致病过程的作用。方法:收集2022年4~6月南京医科大学附属儿童医院住院患儿临床样本中分离的SA ST239克隆，采用基因敲除和回补技术建立突变株△SasX和回补株△SasX（pRB473-SasX），经RNAⅢ抑制肽（RIP）处理，再采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测SasX基因对RNAⅢ转录水平的影响，绘制增殖曲线观察菌株生长速度，镜下观察菌株聚集能力，半定量实验观察BF形成，并采用qPCR验证BF形成相关基因表达。结果:△SasX株的RNA Ⅲ水平显著低于野生株（t = 4.273、P = 0.037）。△SasX株BF形成能力较野生株显著减弱（t = 4.619、P = 0.032），△SasX（pRB473-SasX）+ RIP株BF形成能力显著低于△SasX（pRB473-SasX）株（t = 7.874、P = 0.011）。△SasX株icaA（t = 5.324、P = 0.027）、sarA（t = 6.250、P = 0.016）和fnbA（t = 4.833、P = 0.031）mRNA水平显著低于野生株；△SasX（pRB473-SasX）+ RIP株icaA（t = 4.386、P = 0.034）和sarA（t = 5.531、P = 0.023）mRNA水平较△SasX（pRB473-SasX）株显著降低。镜下可见野生株有大片聚集成团，△SasX株多为单个散在分布或小范围聚集，△SasX株的聚集能力较野生株显著减弱；△SasX（pRB473-SasX）株的聚集能力和野生株相当，△SasX（pRB473-SasX）+ RIP株的聚集能力较△SasX（pRB473-SasX）株减弱。结论:SA SasX通过调控RNAⅢ的转录表达，促进细菌的聚集和BF形成能力，从而参与其致病过程。

关键词：金黄色葡萄球菌、细胞壁锚定蛋白、群体感应系统、生物膜

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资助基金：南京市卫生科技发展专项资金项目No. YKK20125;南京医科大学科技发展基金项目No. NMUB20210074

在线出版日期：2023-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：252-259