10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2023.04.006
细胞壁锚定蛋白SasX调控RNAⅢ参与金黄色葡萄球菌ST239克隆生物膜形成及致病性相关研究
目的:探讨金黄色葡萄球菌(SA)细胞壁锚定蛋白SasX对RNAⅢ转录表达的调控,揭示其对SA的生物膜(BF)形成和致病过程的作用。方法:收集2022年4~6月南京医科大学附属儿童医院住院患儿临床样本中分离的SA ST239克隆,采用基因敲除和回补技术建立突变株△SasX和回补株△SasX(pRB473-SasX),经RNAⅢ抑制肽(RIP)处理,再采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SasX基因对RNAⅢ转录水平的影响,绘制增殖曲线观察菌株生长速度,镜下观察菌株聚集能力,半定量实验观察BF形成,并采用qPCR验证BF形成相关基因表达。结果:△SasX株的RNA Ⅲ水平显著低于野生株(t = 4.273、P = 0.037)。△SasX株BF形成能力较野生株显著减弱(t = 4.619、P = 0.032),△SasX(pRB473-SasX)+ RIP株BF形成能力显著低于△SasX(pRB473-SasX)株(t = 7.874、P = 0.011)。△SasX株icaA(t = 5.324、P = 0.027)、sarA(t = 6.250、P = 0.016)和fnbA(t = 4.833、P = 0.031)mRNA水平显著低于野生株;△SasX(pRB473-SasX)+ RIP株icaA(t = 4.386、P = 0.034)和sarA(t = 5.531、P = 0.023)mRNA水平较△SasX(pRB473-SasX)株显著降低。镜下可见野生株有大片聚集成团,△SasX株多为单个散在分布或小范围聚集,△SasX株的聚集能力较野生株显著减弱;△SasX(pRB473-SasX)株的聚集能力和野生株相当,△SasX(pRB473-SasX)+ RIP株的聚集能力较△SasX(pRB473-SasX)株减弱。结论:SA SasX通过调控RNAⅢ的转录表达,促进细菌的聚集和BF形成能力,从而参与其致病过程。
金黄色葡萄球菌、细胞壁锚定蛋白、群体感应系统、生物膜
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南京市卫生科技发展专项资金项目No. YKK20125;南京医科大学科技发展基金项目No. NMUB20210074
2023-10-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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