基因1b型不同准种株HCV核心蛋白原核表达质粒pTrc-CKS构建及诱导表达

摘要：

目的 为研究与不同准种HCV 核心蛋白(Core)相互作用的细胞蛋白质组,构建并表达基因1b型的不同准种Core的原核表达质粒pTrc-CKS.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增并获得等长度片段的基因1b型的不同准种株丙型肝炎病毒(HCV)Core基因,氨基酸(aa)长度分别为癌中心株(T):1～172 aa、癌旁株(NT):1～172 aa及C191(HCV-J6):1～172 aa.扩增产物用Bam HⅠ及Eco RⅠ双酶切后插入到原核表达质粒pTrc-CKS中.阳性克隆转化到大肠埃希菌Top 10F'中,异丙基-β-D-S-代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得融合蛋白CKS-Core-His,经Ni2+10F'柱纯化并经Western blot验证.结果 PCR及双酶切验证表明3个基因为1b型的不同准种Core基因成功构建到原核质粒pTrc-CKS中,体外诱导并获得了相应的融合蛋白.结论 构建不同准种Core基因的原核表达质粒获得成功,体外诱导表达并纯化获得了CKS-Core-His融合蛋白,为后续研究与Core相互作用的细胞蛋白质组奠定了基础.

关键词：丙型肝炎病毒、核心蛋白、pTrc-CKS、质粒构建

所属期刊栏目：3

分类号：R73;R37

资助基金：江苏省自然科学基金BK2007031;江苏省高校自然科学基金08KJB320017

在线出版日期：2009-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-8