基于CRISPR/Cas12a系统的人副流感病毒1-4型核酸等温检测方法的建立

摘要：

目的:建立一种基于反转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aid amplification, RT-RAA)联合CRISPR/Cas12a反应的人副流感病毒(human parainfluenza virus, HPIV)核酸检测方法。方法:根据HPIV核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, N)基因保守区序列，设计RT-RAA所需型特异性引物及crRNA(CRISPR RNA, crRNA)，应用Cas12a切割荧光标记探针产生的荧光强度筛选高敏感性HPIV1-4型特异性crRNA并优化crRNA、Cas12a和探针浓度。利用体外转录RNA及临床样本，评价RT-RAA联合CRISPR/Cas12a检测方法的检测下限及特异性。结果:从设计的crRNA中筛选出高敏感性的HPIV1-4型特异性crRNA，并建立基于荧光强度测量的RT-RAA联合CRISPR/Cas12a的HPIV核酸检测方法，该方法对各型HPIV的检测下限均可达到10拷贝/反应。采用该方法检测8种其他呼吸道病毒感染的临床样本，均未显示有交叉反应。结论:建立的HPIV 1-4型荧光法CRISPR核酸检测方法快速、特异，且可无需专业核酸检测设备。

关键词：人副流感病毒、反转录重组酶介导的等温扩增、CRISPR、Cas12a

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资助基金：福建省卫生健康中青年科研重大项目2021ZQNZD006;福建省科技创新平台建设项目2019Y2001;Fujian Provincial Young and Middle-Aged Researchers Major Scientific Research Project2021ZQNZD006;Construction of Fujian Provincial Scientific and Technological Innovation Platform2019Y2001

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：524-529