我国HIV流行毒株分离培养与标准株筛选鉴定

摘要：

目的:通过对我国人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染者全血样本中的HIV进行分离培养与基因型、表型鉴定，筛选符合中华预防医学会团体标准《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)评价要求的HIV标准株。方法:收集48份HIV感染者全血样本；通过分离样本中的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，并将其与健康人全血样本中分离得到的PBMCs共培养分离感染者体内的HIV，测定培养上清液中的p24抗原浓度和病毒滴度；对于分离成功的毒株，提取病毒RNA，对
gag、
pol基因和
env C2V3片段进行扩增测序，判断基因型、基因重组和耐药位点；通过将病毒培养上清液接种到表达CCR5或CXCR4的Ghost细胞，判断病毒嗜性；通过将病毒培养上清液接种MT-2细胞，观察合胞体的形成。
结果:从48份HIV感染者的新鲜EDTA抗凝全血中分离培养出14株病毒培养上清液的p24抗原浓度>1 ng/ml的HIV毒株；1株病毒滴度≥10
5TCID
50/ml，8株滴度≥10
4TCID
50/ml，5株滴度≥10
3TCID
50/ml；其基因型为9株B亚型、3株CRF01_AE重组型和2株CRF07_BC重组型；14株HIV毒株中11株含有耐药位点；细胞嗜性分析结果显示其中8株为CCR5嗜性，6株为CXCR4/CCR5双嗜性；14株毒株中只有2株可引起MT－2细胞病变，为合胞体诱导型。
结论:本研究共分离出14株具有HIV典型生物学、遗传学特性的HIV毒株，经评价1株为符合《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)的HIV标准株。本研究可为HIV-1标准株的筛选提供技术指导。下一步可按照标准株的共享机制完成申请及储备库建设，为HIV疫苗与药物研发等相关研究提供资源。

关键词：人免疫缺陷病毒、标准株、分离、基因型、筛选

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资助基金：国家"十三五"重大传染病防治科技重大专项课题2018ZX10734404-005;The National Key S&T Special Projects on Major Infectious Diseases2018ZX10734404-005

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：286-295