新型冠状病毒巢式PCR检测方法的建立与初步应用

摘要：

目的:建立一种检测新型冠状病毒的巢式PCR方法，作为实时荧光PCR法检测新型冠状病毒的补充，并探讨该方法在临床样本检测中的初步应用价值。方法:根据新型冠状病毒基因保守序列，利用在线软件设计N、S基因引物，构建巢式PCR反应体系，N基因巢式PCR及产物测序用于定性检测，S基因PCR产物测序用于型别初步鉴定。检测梯度稀释新型冠状病毒阳性样本评价检测灵敏度，检测流感病毒和人冠状病毒OC43、229E、HKU1、NL63等样本评价其特异性。分别检测
Ct值>33与
Ct值<33的各15份新型冠状病毒阳性样本，对扩增产物进行测序及比对分析，对检测方法进行验证。
结果:所建立的巢式PCR法可扩增出355 bp N基因片段及449 bp S基因片段的特异性条带，冠状病毒229E、OC43、HKU1、NL63、H3N2亚型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒阳性样本无扩增条带。N基因片段最低检测限可达
Ct值37.21。30份新冠核酸阳性样本中，巢式PCR检测的N基因阳性符合一致率达100%(30/30)；S基因阳性符合一致率达60%(18/30)。28份样本N基因片段测序成功，BLAST与新型冠状病毒相似性100%。12份样本S基因片段可获得位点突变特征结果。
结论:建立了可特异检测新型冠状病毒的巢式PCR方法，并可通过对PCR扩增产物测序分析其位点突变特征，可作为实时荧光PCR法的补充。

关键词：新型冠状病毒、实时荧光PCR法、巢式PCR法

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资助基金：北京市百千万人才工程项目2020A051;首都卫生发展科研专项首发2021-1G-3012;Beijing Million Talent Project2020A051;The Capital Health Development and Research of Special2021-1G-3012

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：214-218