基于PMA-RT-qPCR的新型冠状病毒活性检测方法的建立

摘要：

目的:建立一种可以快速检测新型冠状病毒活性的方法。方法:将热灭活新型冠状病毒样本叠氮溴化丙锭(propidium monoazide，PMA)处理和曝光后对RT-qPCR检测体系进行筛选，优化PMA预处理条件，建立新型冠状病毒PMA-RT-qPCR检测方法。以建立的检测方法对不同温度和含氯消毒剂灭活的病毒进行检测，评估其检测病毒活性的效果。结果:PMA-RT-qPCR检测方法的PMA浓度确定为200 μmol/L，孵育时间为10 min，曝光时间为15 min，以CDC ORF1ab检测体系进行扩增检测；活病毒PMA-RT-qPCR和直接进行RT-qPCR检测结果差异无统计学意义；95 ℃热灭活和含氯消毒剂灭活病毒在不同稀释度下PMA-RT-qPCR检测
Ct值显著高于对照组；70 ℃和56 ℃热灭活病毒只有部分稀释度PMA-RT-qPCR检测
Ct值高于对照组。
结论:建立的PMA-RT-qPCR新型冠状病毒活性检测方法对95 ℃热灭活和含氯消毒剂灭活病毒具有良好的检测效果，为判断样本中病毒的感染性大小提供了辅助手段。

关键词：新型冠状病毒、叠氮溴化丙锭、RT-qPCR、活病毒、灭活病毒

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资助基金：江苏省自然科学基金BK20191489，BK20211373;江苏省六大人才高峰项目WSN-024;江苏省卫健委重点科研项目ZD2021060;Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20191489, BK20211373;Six Talent Peak Projects in Jiangsu ProvinceWSN-024;Key Scientific Research Project of Jiangsu Provincial Health CommissionZD2021060

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：658-663