10.3760/cma.j.cn112866-20210413-00063
HAD患者来源的HIV-1 Nef蛋白对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β细胞因子的影响
目的:探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法:从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia, HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system, CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1
nef基因,与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-
nef真核表达载体,转染人神经胶质瘤细胞U87。转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42 h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况,采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析。转染后27 h~62 h,每间隔5 h收集U87细胞的培养上清,ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量,分析两种细胞因子的动态表达情况。
结果:成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的
nef基因的重组的pcDNA3.1-
nef真核表达载体,转染U87细胞。免疫组化实验的结果显示,Nef蛋白在转染后42 h开始表达,Western blot进一步证实了这一结果。ELISA结果显示,转染后22 h、27 h、32 h、37 h,各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多,但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α:F=0.445,
P=0.837; F=0.579,
P=0.742; F=0.617,
P=0.714; F=2.728,
P=0.057。IL-1β:F=2.656,
P=0.062; F=0.485,
P=0.809; F=0.165,
P=0.982; F=2.463,
P=0.093); 42 h后,各组细胞因子含量逐渐降低,57 h~62 h,TNF-α及IL-1β含量基本维持稳定;转染后42 h、47 h、52 h、57 h、62 h,实验组两种细胞因子的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(TNF-α:F=241.310,
P<0.001; F=242.638,
P<0.001; F=250.114,
P<0.001; F=143.877,
P<0.001; F=146.172,
P<0.001。IL-1β:F=251.578,
P<0.001; F=188.816,
P<0.001; F=276.240,
P<0.001; F=238.136,
P<0.001; F=163.361,
P<0.001),各对照组间或实验组间的差异无统计学意义(
P>0.05)。
结论:HIV-1 Nef蛋白能诱导并增强U87细胞分泌TNF-α和IL-1β的能力,而HAD患者体内不同来源的HIV-1 Nef蛋白发生氨基酸变异对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β无影响。
HIV-1、HIV-1相关痴呆、HIV-1 Nef蛋白、TNF-α、IL-1β
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2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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