高通量表达系统在EV71单链抗体表达中的应用

摘要：

目的 建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法,将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达.方法 PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段,使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒.瞬时转染293T细胞,并用Western blot、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光抗体试验(indirect immunofluorescent antibody,IFA)检测抗体表达盒中ScFv的表达和抗体的活性.从噬菌体库淘选出的阳性克隆中挑取96个抗体,用该表达盒进行高通量表达,并对表达效果进行评价.结果 成功扩增出3个基因片段,并将3个片段连接成1个线性的表达盒.线性表达盒可直接在293T细胞中瞬时表达,表达上清经Western blot检测可见约相对分子质量为38× 103的条带;ELISA和IFA结果均显示表达出来的ScFv抗体能与其对应的抗原特异性结合.同时该系统可以用于噬菌体抗体库中抗体基因的高通量表达.结论 成功构建了ScFv的线型表达盒,并实现了抗体的快速高通量表达.

关键词：ScFv抗体、抗体表达盒、重叠PCR、高通量表达

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资助基金：江苏省疾病预防控制中心科教强业项目JKRC2016020

在线出版日期：2020-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：641-645