整合型HIV DNA荧光定量检测法的临床初探

摘要：

目的 建立外周血单核细胞整合型HIV DNA荧光定量ALu-PCR的检测方法.方法 收集我院就诊的病毒载量＜ 20IU/ml的艾滋病患者、耐药患者和初诊患者各10例.培养ACH2细胞系,每个细胞含有一个HIV基因组.构建pMD19T-CD3质粒,测定浓度,计算其拷贝数.选用针对HIV3'长末端重复序列的引物ULF1,和针对人类基因高度保守的Alu1和Alu2序列的引物,对1∶5梯度稀释,共8个梯度的ACH2基因组及样本进行预扩增.将预扩增的产物用引物Lambda T、UR2及HIV Taqman探针进行整合型HIV DNA的荧光扩增;用引物CD3IN5、CD3IN3及CD3 Taqman探针对预扩增产物及1∶5梯度稀释的CD3质粒进行CD3荧光扩增.结果 以1∶5梯度稀释的CD3质粒为标准品,得到的线性回归方程y=-2.731x +43.01,(R2 =0.953),根据一个人类细胞含2个CD3基因,可得到样本及ACH2的细胞数.ACH2的细胞数即HIV拷贝数为4.271×104;以1∶5梯度稀释的ACH2为标准品,回归方程为y=-3.146x +39.11 (R2 =0.968)计算可得样本整合型HIV DNA;用样本的整合型HIV-1 DNA/样本的CD3的拷贝数,即为单位细胞中整合型HIV拷贝数.通过对不同组间的t检验,各组间无差异(P＞0.05).结论 该方法对于低拷贝HIV病毒量的检测有优势,提示通常的抗病毒治疗无法有效攻击潜伏库中的病毒,同时也为新的干预治疗提供了一种评价依据.

关键词：HIV、荧光定量PCR、ACH2细胞、CD3基因

所属期刊栏目：31

分类号：TN9;TP2

资助基金：上海市卫生和计划生育委员会科研课题20144Y0075Research Program of Shanghai Municipal Commission of Health and Family Planning 20144Y0075

在线出版日期：2018-02-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：566-569