应用外部引导序列切割人巨细胞病毒UL148 RNA的研究

摘要：

目的 研究人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)临床病毒株UL/b'区域UL148基因功能及抗HCMV治疗新策略,应用DNA性质外部引导序列(External guide sequences,EGS)在体外抑制UL148 RNA的表达.方法 应用RNA structure生物软件模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS,并合成EGS核苷酸序列.应用PCR方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148 RNA及M1RNA,其中UL148以32p标记并进行体外转录.混合EGS、M1RNA及UL148 RNA于切割反应液中,反应1h后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果.结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58 ～72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57与UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的茎环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可切割UL148RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具.

关键词：人巨细胞病毒、外部引导序列、UL148、临床病毒株

所属期刊栏目：31

分类号：R37;R44

资助基金：国家自然科学基金81070516;广东省自然科学基金2015A030313726,9151008901000085;广东省医学科研基金A2015133,A2009078.National Natural Science Foundation of China81070516;Natural Science Foundation of Guangdong Province of China2015A030313726,9151008901000085;Medical Scientific Research Foundation of Guangdong ProvinceA2015133,A2009078

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：185-188