EV71检测细胞系的构建与鉴定

摘要：

目的 构建71型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)检测细胞系.方法 以含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的EV71感染性克隆pWSK-T7-EV71-GFP为分子基础,构建GFP基因嵌入病毒基因组两端非编码区的表达盒UGFP,并将其克隆入质粒pLV-Puro获得慢病毒表达载体pLV-UGFP.将质粒pLV-UGFP和包装质粒Helper用脂质体转染法共转染入HEK293T细胞中,转染48 h后,用收集到的慢病毒颗粒感染BHK-21细胞,经嘌呤霉素压力筛选和系列稀释法获得用于外源EV71检测的工程细胞系BHK/UGFP.结果 BHK/UGFP细胞感染EV71 48 h后,可检测到GFP的表达,作为对照组细胞感染甲病毒属的辛德毕斯病毒(XJ-160)和黄病毒属的乙脑病毒(P3)等单股正链RNA病毒,则检测不到绿色荧光.该检测细胞系用不同滴度的EV71感染,至少可以检测到10 PFU/ml的EV71.结论 构建的BHK/UGFP检测细胞系可用于外源EV71的检测,且该检测方法特异性和灵敏性均良好.

关键词：肠道病毒属、工程细胞系

所属期刊栏目：30

分类号：R575;S852.65;S

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：402-405