克里米亚-刚果出血热病毒可视化逆转录环介导等温扩增快速检测法的建立

摘要：

目的 建立克里米亚刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)的可视化逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RTLAMP)快速检测法.方法 体外合成CCHFV的S基因,构建重组质粒,体外转录为模板RNA,在线设计3组LAMP引物,使用实时浊度仪筛选出最佳引物,以羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)作为指示剂,建立可视化RT-LAMP反应体系.结果 实时浊度检测结果显示合成的3组LAMP引物中第1组引物的扩增效率最高,峰值出现于20 min.添加环引物后,扩增效率进一步提高,13 min即可达到峰值.利用最佳引物建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法最低检测限浓度为10拷贝/μl,检出时间为30 min,较巢式RT-PCR法和实时定量RT-PCR法分别高1-3个数量级.该方法稳定性好,不会与症状相近的病原体如肾综合征出血热汉坦病毒(汉滩型和汉城型)、马尔堡病毒、新型布尼亚病毒、埃博拉病毒(GP蛋白和VP蛋白)产生交叉反应.结论 建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法,灵敏度好、特异度高、快速廉价、操作简单,无需开盖即可直接观察结果,适用于条件有限的基层单位和偏远地区.但仍需临床样本进行进一步验证.

关键词：克里米亚-刚果出血热、逆转录环介导等温扩增、可视化检测

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资助基金：国家重大传染病防治专项2013ZX10004103,2013ZX1004218;江苏省科技支撑计划社会发展项目BE2013603;军队重点项目BWS14J025 National Special Project of Prevention and Treatment of Major Communicable Diseases2013ZX10004103,2013ZX1004218;Jiangsu Provincial Supporting Technology social development ProjectBE2013603;Military Key ProjectBWS14J025

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：355-360