易错PCR提高人源抗狂犬病毒单链抗体的亲和力

摘要：

目的 通过易错PCR技术提高1株人源抗狂犬病毒单链抗体RV08的亲和力.方法 采用Agilent公司GeneMorph Ⅱ Random Mutagenesis Kit对RV08轻、重链可变区进行易错PCR扩增,随机引入突变,通过单链抗体(Single-chain antibody fragment ScFv)噬菌体呈现技术构建随机突变抗体文库,经狂犬病毒颗粒aG株固相富集筛选,通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定.利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过非竞争ELISA测定突变抗体亲和力.结果 RV08随机突变抗体库的库容为6×106 cfu/ml,目的基因插入率为100％.重链序列突变频率约为0.95％,轻链序列突变频率约为1.2％,最后获得5株高亲和力的抗体突变株,其中3株抗体HL46、HL2和HL37亲和力分别为原始克隆RV08的1.79倍、1.47倍和1.23倍.结论 易错PCR技术与噬菌体抗体库技术相结合使得抗体亲和力获得明显提高,为抗体的体外亲和力成熟提供了参考方法.

关键词：狂犬病毒、单链抗体、亲和力

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资助基金：重大新药创制2014ZX09201041004,2013ZX09304103001006State Project For Essential Drug Research and Development2014ZX09201041004,2013ZX09304103001006

在线出版日期：2016-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：328-332