GFP标记Ⅸ蛋白的重组腺病毒的构建与鉴定

摘要：

目的 为了更加直观地观察腺病毒(Adenovirus,Ad)与细胞之间的相互作用,本研究拟构建一株经绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)标记(pⅨ)蛋白的5型重组腺病毒(Ad5-IXGFP).方法 我们将GFP基因构建至腺病毒穿梭质粒pShuttle中Ⅸ基因3”端,通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内的同源重组,获得了重组腺病毒质粒pAd5-IXGFP.将pAd5-IXGFP质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒Ad5-IXGFP.结果 经扩增和超速离心纯化后可获得浓度为6.9×1011 vp/ml的重组腺病毒.该病毒于4℃与HEp-2细胞孵育后,重组病毒吸附于HEp-2细胞表面,用荧光显微镜观察,可见绿色荧光.结论 利用反向遗传学技术对重组腺病毒外壳蛋白pⅨ进行修饰,成功制备的经GFP标记的重组腺病毒可用于实时动态追踪腺病毒颗粒感染细胞的过程.

关键词：腺病毒、衣壳蛋白Ⅸ、绿色荧光蛋白、荧光标记

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资助基金：国家自然科学基金31400156National Natural Science Foundation of China 31400156

在线出版日期：2016-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：204-207