乙型肝炎病毒活性RNase H酶的表达纯化及在药物筛选中的应用

摘要：

目的 获得具有体外活性并且能够用于药物筛选的乙型肝炎病毒(HBV) RNaseH酶.方法 以pMAL-c5xHis为骨架,构建重组基因C型HBV RNase H酶表达质粒,通过大肠埃希菌高效表达出分子量为60KDa的可溶性目的蛋白,通过镍亲和层析法纯化出HBV RNase H酶.Commassie染色和Western Blot方法鉴定目的蛋白;采用寡核苷酸引导的RNA切割法鉴定HBV RNase H酶活性、对温度变化的稳定性及其在HBV RNase H酶抑制剂体外筛选中的应用.结果 Commassie染色、Western Blot分析结合寡核苷酸引导的RNA切割法鉴定显示成功表达和纯化出具有活性的HBVRNase H酶,酶活性对温度变化具有稳定性,并且对HBV RNase H酶抑制剂具有良好的敏感性.结论 通过基因重组和镍亲和层析法可以体外获得具有活性的HBV RNase H酶,并可以用于HBVRNase H酶抑制剂的体外筛选.

关键词：肝炎病毒,乙型、RNase H、活性、药物

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资助基金：郑州大学第二附属医院人才培育基金2014

在线出版日期：2016-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：470-474