高尔基体蛋白73原核表达系统的构建及单克隆抗体的制备

摘要：

目的 克隆、表达高尔基体蛋白73(GP73),并制备单克隆抗体.方法 用逆转录聚合酶链反应法从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增GP73编码序列,将产物与pQE31载体连接,转化人大肠埃希菌BL21,诱导表达后通过His标签进行纯化,用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备单克隆抗体,并对其进行鉴定.结果 重组载体经序列分析与报道序列同源性100％,并获得了重组蛋白.筛选出5株能稳定分泌抗GP73的单克隆抗体杂交瘤细胞株,免疫球蛋白类型有2株为IgG1类.Western Blot印迹显示这些单抗能特异结合GP73蛋白.结论 成功构建了人高尔基体蛋白73原核表达体系,并获得了单克隆抗体.

关键词：高尔基体、蛋白质73、克隆、分子、抗体、单克隆、肝肿瘤

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分类号：S852.659.6;R735.7;R392.11

资助基金：首都临床特色应用研究项目2005-2038;Z111107058811068

在线出版日期：2013-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：301-303