利用磁珠分选和单细胞RT-PCR筛选HIV-1 Env特异性单克隆抗体的研究

摘要：

目的 建立一种简单易行的从HIV-1感染者中筛选包膜糖蛋白(envelope glycoprotein,Env)特异性单克隆抗体的方法.方法 采集HIV-1感染者抗凝全血,分离外周血单个核细胞,利用生物素标记的HIV Gp120抗原与B细胞膜上的IgG特异性结合,然后用链霉亲和素标记的磁珠分选出能够产生Env特异性抗体的记忆性B细胞.用单细胞RT-PCR法从记忆性B细胞中扩增抗体的重链可变区基因与轻链可变区的基因并克隆到表达载体中,将携带重链基因的质粒与携带轻链基因的质粒共转染293T细胞,获得HIV-1特异性人单克隆抗体,并进行抗体结合活性的鉴定.结果 从1例我国HIV-1感染者记忆性B细胞中筛选出3株对HIV-1 Env抗原有结合活性的单克隆抗体.结论 利用生物素标记抗原与记忆性B细胞特异结合,并用亲和素标记的磁珠对细胞进行分选,结合单细胞RT-PCR技术可以成功筛选出抗原特异性的单克隆抗体.

关键词：HIV-1、抗原、Gp120、抗体、单克隆、聚合酶链反应

所属期刊栏目：27

分类号：R392;R739.62;R512.91

资助基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项2012ZX10001005

在线出版日期：2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：123-125