10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2012.01.023
我国主要HIV-1流行株耐药基因型检测方法的研究
目的 研究针对中国主要HIV-1流行株优化的实验室自建耐药基因型实验室自建检测方法( in-house)的扩增效果及检测敏感度.方法 选取中国主要流行亚型的B、CRF07 _BC、CRF01_AE亚型各10份样本,这些样本为2007 -2009年本实验室采集采自河南、新疆、湖南三地已接受抗病毒治疗患者的样本,并已确定亚型.选用生物梅里埃公司的Nuclisens Easy Q方法对选取的30份样本的病毒载量平行进行3次病毒载量检测,取平均值作为载量数值.对每份样本用HIV阴性血浆进行5个浓度的梯度稀释,稀释为> 1000、401~1000、101 ~400、50 ~100和<50拷贝/ml 5个浓度梯度.提取核酸后,进行RT-PCR和巢式PCR扩增,对扩增结果进行统计扩增结果,确定每种亚型的扩增效果和最低检测限.随机选取12份样本的初浓度和最低浓度进行测序,对测序结果进行耐药结果分析和序列一致性分析.结果 所选样本的病毒载量介于2.03×102 ~5.92×104拷贝/ml之间.自建的In-house法对载量50 ~1000拷贝/ml范围的样本仍可达到较高的扩增效果(86%).样本稀释前后耐药位点相似,序列一致性在97%以上,在低病毒载量时优势病毒株的检测则更敏感.结论 自建的实验室方法的灵敏度较高,对低病毒载量水平的样本仍有较高的扩增效果.
抗病毒治疗、病毒载量、基因型、聚合酶链反应
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R373(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
2012-06-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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