肠道病毒71型重组VP1蛋白的表达和EV71型手足口病血清学诊断方法的建立

摘要：

目的 获得纯化的具有免疫活性的肠道病毒71型VP1蛋白,建立EV71感染早期、快速和准确的ELISA血清学诊断方法.方法 通过PCR方法扩增出VP1基因,定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),阳性质粒转化入E.coli B121(DE3)感受态细胞经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹分析目的 蛋白的表达水平.纯化的VPI蛋白用作包被抗原,建立手足口病(HFMD)患者抗-EV71-IgM和IgG的血清学诊断方法.结果 成功表达和纯化了VP1重组蛋白,所表达的蛋白能被EV71型手足口病患者血清所识别.调查发现,与正常人和EV71阴性手足口病患儿比较,EV71阳性手足口病血清中抗-EV71-IgM和IgG中A值显著升高.差异具有统计学意义(P<0.05).与RT-PCR结果比较,发现该方法IgM的诊断敏感性和特异性分别为73%和77%;该IgG诊断方法的敏感性和特异性分别为82%和83%.完成该试验仪需4 h.结论 利用pET原核表达系统成功克隆、表达和纯化了肠道病毒71型重组外壳蛋白VPI,且具有良好的抗原性.该抗原可用于研制EV71血清学诊断试剂盒.

关键词：肠道病毒71型、人、重组蛋白、血清学诊断、酶联免疫吸附测定

所属期刊栏目：22

分类号：R5(内科学)

在线出版日期：2009-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：492-494