DNA循环测序中的影响因素和图例分析

摘要：

目的通过对2 040份样品的DNA测序,回顾性分析和研究DNA循环测序过程中一些影响因素及其序列图谱.方法对测序中模板、引物、测序反应条件及其产物的纯化等因素进行比较研究.结果模板因素是测序成败的主要原因,占测序失败的70%.模板的质量直接影响着测序图谱,模板纯度不够,序列曲线表现为可读序列短,开始时波峰过高不易判读,然后峰值迅速降低,并有噪峰出现,信号减弱,在原始资料中核苷酸曲线的波峰扁平或者没有信号.模板浓度过高,序列曲线呈现头重脚轻,可读序列短;而浓度过低,则信号衰减.引物问题引起测序失败占15.4%,主要原因为引物失效,与模板匹配不完全,Tm值过低等因素.利用75%异丙醇沉淀纯化测序反应产物,效果好且简单,经济.结论测序的质量与模板的纯度、浓度有着直接的关系,在大规模的测序中,推荐使用异丙醇沉淀法.

关键词：循环测序、DNA、噪峰

所属期刊栏目：15

分类号：R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划863-102-07-02-07

在线出版日期：2004-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：283-286