10.3760/cma.j.cn501120-20210930-00343
烧伤患者耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌携带质粒及其与菌株传播的相关性
目的:探索烧伤患者耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌（CRKP）的质粒携带情况，分析这些质粒与CRKP传播的相关性。方法:采用回顾性观察性研究方法。取从陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院2017年1—12月收治的22例烧伤患者［男20例、女2例，年龄（42±16）岁］临床相关标本中分离保存的26株CRKP，对其进行编号。采用碱裂解法提取菌株质粒，用核酸浓度检测仪测定浓度后行琼脂糖凝胶电泳观察条带情况，并对质粒行大致分型。从各个质粒分型中选取最小编号CRKP携带质粒转化感受态大肠埃希菌TOP10菌株（以下简称TOP10菌株），观察各转化菌株与TOP10菌株涂布含氨苄西林的固体LB培养基并过夜培养后生长情况，计算成功转化比例。取成功转化TOP10菌株的最小编号CRKP携带质粒的转化菌株（以下简称最小成功转化菌株）与相应编号CRKP，提取菌株携带质粒，行琼脂糖凝胶电泳观察条带情况。取前述各成功转化菌株与TOP10菌株，采用药物敏感试验检测菌株对17种临床常用抗生素的耐药性。取最小成功转化菌株携带质粒，使用第二代测序技术进行基因测序，并完成蛋白质编码基因预测、序列比对等生物信息分析，后续根据耐药基因携带情况命名为pKP03-NDM1。根据最小成功转化菌株携带质粒全基因组序列，采用PCR法及琼脂糖凝胶电泳与基因测序检测剩余25株CRKP携带质粒的新德里金属β-内酰胺酶-1（
blaNDM-1）基因携带情况，结合文献分析26株CRKP多位点序列分型中的ST分型。
结果:从26株CRKP中均提取到质粒，质粒质量浓度为19.3~189.8 ng/μL。26株CRKP携带质粒的琼脂糖凝胶电泳均可见2 500 bp以上条带，可大致分为A、B、C、D、E、F型6个型别。过夜培养后，在含氨苄西林的固体LB培养基上，未见A、B、D、E型CRKP携带质粒转化TOP10菌株或单纯TOP10菌株菌落生长，可见3号CRKP携带的C型质粒和15号CRKP携带的F型质粒转化TOP10菌株大量菌落生长（转化菌株被分别命名为TOP10-pKP03、TOP10-pKP15），成功转化比例为1/3。TOP10-pKP03携带质粒琼脂糖凝胶电泳图仅表现为1个条带，大小与3号CRKP携带质粒最大的条带一致。TOP10菌株对所检测的17种临床常用抗生素全敏感；TOP10-pKP03和TOP10-pKP15对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类抗生素耐药，对单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素以及替加环素敏感。TOP10-pKP03携带质粒全长为41 190 bp，该质粒携带
blaNDM-1、
bleMBL、
T4SS、博来霉素抗性基因且包含接合转移元件、松弛酶等片段，与从大肠埃希菌JN24中提取的质粒pJN24NDM1长度相同且核苷酸相似性为99%。从16株（61.5%）CRKP携带质粒中检测到了
blaNDM-1基因，该16株CRKP的ST型别中，ST11型11株，ST215型、ST260型、ST395型、ST2230型、新ST型各1株；不携带
blaNDM-1基因的10株CRKP的ST型别中，ST11型8株，ST395型、ST2230型各1株。
结论:自烧伤患者CRKP中分离测序了一个高携带率的包含
blaNDM-1基因的质粒pKP03-NDM1，该质粒可能通过介导
blaNDM-1基因在CRKP间以及CRKP和大肠埃希菌间的水平转移，导致耐药性传播。
烧伤、感染、抗药性，多药、质粒、耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌
38
国家自然科学基金青年科学基金项目81801916;国家自然科学基金地区科学基金项目81960353;中国博士后科学基金2020M670112ZX;省部共建协同创新中心项目教科技厅函【2020】39号;遵义市科技局联合基金HZ-2019-50;Youth Science Fund Project of National Natural Science Foundation of China81801916;Regional Science Fund Project of National Natural Science Foundation of China81960353;China Postdoctoral Science Foundation2020M670112ZX;Collaborative Innovation Center of Chinese Ministry of Education2020-39;Zunyi City Science and Technology Bureau Joint FundHZ-2019-50
2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1140-1147
