应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体基因条件性敲除小鼠模型及其鉴定

摘要：

目的 应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体(p75NTR)基因条件性敲除的小鼠模型并进行鉴定. 方法 应用Cre-loxP系统将5只6～8周龄雌雄不限(用于繁殖的小鼠鼠龄和性别下同)p75 NTRflox/flox转基因C57BL/6J小鼠和5只角蛋白14启动子驱动(KRT14-)Cre+/-转基因C57BL/6J小鼠进行饲养和杂交.从繁育产生的第1代小鼠中筛选出5只p75NTRflox/+·KRT14-Cre-/-小鼠与5只p75NTRflox/flox小鼠进行交配,获得第2代小鼠.第2代小鼠出生20 ～25 d,切取每只小鼠鼠尾,通过PCR法进行基因型鉴定.分别选取经鉴定后生长至6周龄的p75 NTR基因完全条件性敲除小鼠、野生型小鼠各4只处死,切取腹部皮肤组织和脑组织,经免疫组织化学染色对比观察p75NTR在2种小鼠2种组织中的表达情况;另切取腹部皮肤组织,经苏木精-伊红染色观察2种小鼠组织形态学变化. 结果 (1)共繁育第2代小鼠20只,其中4只小鼠基因型为p75NTRflox/flox·KRT14-Cre+/-(p75NTR-/-),即p75 NTR基因完全条件性敲除小鼠;5只小鼠基因型为p75 NTRflox/+·KRT14-Cre+/-,即p75NTR基因部分条件性敲除小鼠;5只小鼠基因型为p75NTRflox/flox·KRT14-Cre-/-,6只小鼠基因型为p75NTRflox/+·KRT14-Cre-/-,均为野生型小鼠.(2)p75NTR基因完全条件性敲除小鼠皮肤表皮组织中未见p75 NTR表达,野生型小鼠皮肤表皮组织中可见较多p75NTR阳性表达;p75 NTR基因完全条件性敲除小鼠和野生型小鼠脑组织中均有丰富p75 NTR阳性表达.(3)p75NTR基因完全条件性敲除小鼠和野生型小鼠皮肤表皮组织均无生长异常情况且毛囊结构均完整. 结论 应用Cre-loxP系统能够成功构建表皮细胞中p75 NTR基因条件性敲除小鼠模型且小鼠皮肤组织形态无明显变化.

关键词：受体、神经生长因子类、角蛋白14、模型、动物、条件性基因敲除、表皮细胞、Cre-loxP系统

所属期刊栏目：35

资助基金：国家自然科学基金81571911、81772092;山东省重点研发计划2018GSFl18151National Natural Science Foundation of China81571911,81772092;Shandong Key Research and Development Plan2018GSF118151

在线出版日期：2019-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：740-745