内皮抑素预处理对人皮肤成纤维细胞纤维化的作用和机制

摘要：

目的 探讨内皮抑素预处理对人皮肤Fb纤维化的作用和相关机制. 方法 将人皮肤Fb体外常规培养后,取第3～5代细胞进行实验.按照随机数字表法将细胞分为空白对照组、内皮抑素组、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)组、内皮抑素+PDGF-BB组、TGF-β1组、内皮抑素+TGF-β1组,每组3孔.空白对照组细胞仅用DMEM培养液培养24 h;内皮抑素组细胞用含5μg/mL内皮抑素的DMEM培养液培养24 h;PDGF-BB组和TGF-β1组细胞分别用含200 ng/mL PDGF-BB、10 ng/mL TGF-β1的DMEM培养液培养24 h;内皮抑素+PDGF-BB组细胞用含5μg/mL内皮抑素的DMEM培养液预处理48 h后,再用含200ng/mL PDGF-BB的DMEM培养液培养24 h;内皮抑素+TGF-β1组细胞用含5μg/mL内皮抑素的DMEM培养液预处理48 h后,再用含10 ng/mL TGF-β1的DMEM培养液培养24 h.每组收集3孔细胞的培养上清液,ELISA法检测Ⅰ型胶原含量;每组收集3孔细胞,采用蛋白质印迹法检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGF受体β(PDGFRβ)、磷酸化PDGFRβ(p-PDGFRβ)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达.对数据行单因素方差分析、SNK检验. 结果 (1)与空白对照组的(5.05 ±0.29) pg/mL比较,内皮抑素组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量为(4.72±0.37) pg/mL,二者相近(P＞0.05);PDGF-BB组和TGF-β1组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量分别为(8.60±0.57)、(9.20±0.64) pg/mL,均显著升高(p值均小于0.05).内皮抑素+PDGF-BB组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量为(5.32 ±0.17)pg/mL,低于PDGF-BB组(P＜0.05);内皮抑素+TGF-β1组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量为(5.41±0.20) pg/mL,低于TGF-β1组(P＜0.05).(2)与空白对照组细胞α-SMA、PDGFRβ、p-PDGFRβ、p-ERK1/2蛋白表达量比较,内皮抑素组无明显差异(P值均大于0.05),PDGF-BB组、TGF-β1组均明显增加(P值均小于0 01).内皮抑素+ PDGF-BB组、内皮抑素+TGF-β1组细胞α-SMA、PDGFRβ、p-PDGFRβ、p-ERK1/2蛋白表达量均分别低于PDGF-BB组、TGF-β1组(P值均小于0.05). 结论 内皮抑素预处理可抑制人Fb纤维化和向肌Fb转化,这可能与内皮抑素下调p-PDGFRβ、PDGFRβ和p-ERK蛋白表达有关.

关键词：内皮抑素类、成纤维细胞、血小板源性生长因子、信号通路

所属期刊栏目：33

分类号：TQ ;R73

资助基金：浙江省自然科学基金LY15H150004National Natural Science Foundation of Zhejiang Province of China LY15H150004

在线出版日期：2017-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：694-698