人黑素细胞胞吐黑素体直观证据的观察研究

摘要：

目的 探究皮肤黑素体的分泌和传递机制,为人黑素细胞胞吐黑素体寻找直观形态学证据. 方法 取健康青少年包皮环切术后废弃包皮,分离并培养黑素细胞(MC)及KC,倒置显微镜下观察细胞形态,免疫组织化学染色法对MC进行鉴定,免疫荧光染色法对KC进行鉴定.将MC按随机数字表法分为空白对照组、α促黑素细胞激素(α-MSH)刺激组、前列腺素E2(PGE2)刺激组及KC共培养组,每组4皿.空白对照组细胞用8 mL MCDB 153培养液培养;α-MSH刺激组细胞用8 mL含有100 nmol/L α-MSH的MCDB 153培养液培养;PGE2刺激组细胞用8 mL含有200 nmol/L PGE2的MCDB 153培养液培养;KC共培养组细胞加入2×105个/mL KC,用8 mL MCDB 153培养液培养.培养第3天,原子力显微镜(AFM)下观察空白对照组以及KC共培养组MC表面形态;环境扫描电镜(ESEM)下观察4组MC表面形态,并计数细胞表面坑状结构及球形颗粒.对数据行单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)MC形态单一,呈长梭形,有2个或3个树突,胞体呈强反光性;KC形态均一,呈多边形、铺路石状,胞核居中,胞质内可见黑色或褐色点状物质.MC呈铁锈色,染色均一,未见其他细胞混染;KC胞质呈鲜红色荧光,胞核未染色.综上,分离培养的细胞为MC和KC.(2)AFM下可见空白对照组MC树突及胞体表面较光滑,坑状结构较少.KC共培养组MC树突表面粗糙,坑状结构较空白对照组MC树突表面明显增多;KC共培养组MC树突尾端表面坑状结构较胞体表面明显增多,坑状结构为鳞状层叠结构.(3) ESEM下可见空白对照组MC树突主干表面光滑,偶见小球状结构,随着树突向外延伸,树突尾部呈伞状展开,伞状表面分布大小较均匀的坑状凹陷.α-MSH刺激组、PGE2刺激组、KC共培养组MC表面坑状结构数分别为(90±38)、(63±15)、(62±29)个,较空白对照组的(33±11)个明显增多(P值均小于0.05);α-MSH刺激组MC表面坑状结构数较PGE2刺激组、KC共培养组明显增多(P值均小于0.05).α-MSH刺激组MC表面球形颗粒数为(80 ±30)个,较空白对照组的(29±8)个、PGE2刺激组的(47±22)个、KC共培养组的(42±16)个明显增多(P值均小于0.05). 结论 人MC表面的坑状结构与黑素体胞吐分泌作用密切相关,为证明黑素体通过胞吐作用进行分泌和传递提供了直观形态学证据.

关键词：黑素细胞、胞吐作用、显微镜检查、原子力、黑素体、环境扫描电镜

所属期刊栏目：33

分类号：R75;R73

资助基金：国家自然科学基金81372051;北京市科技计划“首都特色”专项Z151100004015199

在线出版日期：2017-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：386-389