人羊膜间充质干细胞培养上清液对人成纤维细胞生物学功能的影响

摘要：

目的 探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)培养上清液(hAMSC-CS)对人Fb生物学功能的影响. 方法 (1)取废弃胎盘新鲜羊膜组织,分离hAMSC,并进行传代培养.倒置相差显微镜下观察培养3d及第3代hAMSC形态.(2)取2批次第3代hAMSC,免疫荧光染色法检测细胞波形蛋白表达,流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD73、CD105及CD45表达.(3)收集培养72 h的第3代hAMSC-CS,ELISA法检测其中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、血管内皮生长因子(VEGF)、EGF、bFGF的含量.(4)取包皮环切术后废弃包皮,分离人Fb,并进行传代培养.采用第3代人Fb进行以下实验.按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为空白对照组及10％、30％、50％、70％hAMSC-CS组,每组48孔.空白对照组用含体积分数2％ FBS的DMEM/F12培养液培养,后4组分别用含相应体积分数hAMSC-CS和体积分数2％ FBS的DMEM/F12培养液培养.培养12、24、48、72 h,采用细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性.选取使人Fb增殖活性最高的相应体积分数hAMSC-CS用于以下实验.(5)另取人Fb,分为空白对照组及50％ hAMSC-CS组,同(4)处理,每组4孔.分别于划痕后0(即刻)、12、24、48、72 h,于倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离.(6)另取人Fb,同(5)分组处理,每组3瓶,流式细胞仪检测细胞凋亡率.对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验、t检验. 结果 (1)培养3d,多数hAMSC形态较大,呈纺锤形多突起的Fb样或扁平多角形.第3代hAMSC呈梭形或纺锤形,波形蛋白表达呈强阳性,细胞表面标志物CD90、CD73、CD105表达阳性,CD45表达阴性.(2)hAMSC-CS中IGF-Ⅰ、VEGF、EGF、bFGF的含量分别为(11.7±1.0)、(316±68)、(6.1±0.4)、(1.49±0.05) pg/mL.(3)培养12 ～72 h,各hAMSC-CS组人Fb增殖活性明显高于空白对照组(P值均小于0.01),50％ hAMSC-CS组人Fb增殖活性最高.(4)划痕后0h,2组人Fb划痕宽度几乎相同.划痕后12 ～72 h,50％ hAMSC-CS组人Fb迁移距离明显长于空白对照组(P值均小于0.01).(5)空白对照组人Fb凋亡率为(16.2±2.4)％,明显高于50％ hAMSC-CS组的(7.4±3.6)％(t=6.710,P＜0.01). 结论 hAMSC-CS对人Fb的增殖和迁移具有促进作用,对人Fb的凋亡有抑制作用.

关键词：间质干细胞、成纤维细胞、细胞增殖、细胞运动、细胞凋亡、人羊膜间充质干细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R542.2;R730.21;R329.2

在线出版日期：2016-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：370-375