树突状表皮T淋巴细胞在小鼠皮肤移植免疫排斥反应中的作用及机制

摘要：

目的 探讨树突状表皮T淋巴细胞(DETC)在小鼠皮肤移植免疫排斥反应中的作用及其相关机制. 方法 (1)取1只野生型C57B L/6雄性小鼠背部全层皮肤,分离表皮细胞,流式细胞仪检测DETC表达情况及细胞表型.另取1只野生型C57BL/6雄性小鼠背部全层皮肤,分离表皮,免疫荧光技术观察DETC形态学特征.(2)分别取4只绿色荧光蛋白(GFP)标记C57BL/6雄性小鼠、7只野生型C57BL/6雌性小鼠(野生型组)以及7只γδT淋巴细胞δ基因敲除C57B L/6雌性小鼠(基因敲除组).剪去野生型组与基因敲除组小鼠背部1.4 cm×1.4 cm大小全层皮肤,移植GFP标记C57BL/6雄性小鼠背部1.2 cm×1.2 cm大小全层皮肤,通过小动物活体成像仪及肉眼观察,判定并记录移植皮片存活时间.(3)取2只野生型C57B L/6雄性小鼠,分离表皮细胞,加入48孔板,按随机数字表法分为激活组和对照组,每组4孔.激活组加入2 μg/mL刀豆蛋白A 10 μL,对照组加入等量PBS,处理24 h后用流式细胞仪检测DETC表达γ干扰素情况.(4)取4只GFP标记C57BL/6雄性小鼠(供体);取14只野生型C57 BL/6雌性小鼠(受体),按随机数字表法分为γ干扰素中和组和对照组,每组7只.按(2)中方法构建皮肤移植模型,术前和术后72 h,γ干扰素中和组小鼠腹腔注射1 mg/mLγ干扰素中和抗体200 μL,对照组注射等量生理盐水,同(2)中方法观察并记录移植皮片存活时间,并将γ干扰素中和组与(2)中基因敲除组移植皮片存活时间进行比较.对皮片生存曲线进行Log-rank(Mantel-Cox)检验. 结果 (1)小鼠皮肤表皮细胞内DETC阳性表达率为7.27％,且DETC均为CD3+表型细胞.DETC呈树突状散在分布于小鼠皮肤表皮中.(2)基因敲除组小鼠移植皮片存活时间为22 ～ 35 d,较野生型组的12 ～ 16 d明显延长(x2=14.10,P＜0.001).(3)激活组DETC的γ干扰素表达率为22.70％,明显高于对照组的0.51％.(4)γ干扰素中和组小鼠移植皮片存活时间为19 ～24 d,较对照组的12～16 d明显延长(x2=13.60,P＜0.001),但与(2)中基因敲除组小鼠移植皮片存活时间相近(x 2 =0.06,P=0.810). 结论 DETC在C57BL/6小鼠皮肤移植免疫排斥反应中起促进作用,该作用可能是通过其分泌γ干扰索实现的.

关键词：皮肤移植、干扰素γ、移植免疫学、树突状表皮T淋巴细胞

所属期刊栏目：31

分类号：R512.62;R392;R963

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2015-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：125-129