不同时间低氧处理对人表皮细胞株HaCaT运动和增殖的影响

摘要：

目的 探讨低氧处理人表皮细胞株HaCaT不同时间对其运动和增殖的影响. 方法 (1)取对数生长期HaCaT细胞,用含体积分数10％ FBS的RPMI 1640培养液(培养方法下同)培养,按随机数字表法(分组方法下同)分为正常对照组(常规培养,下同)以及低氧1、3、6h组,每组6孔,后3组细胞于含体积分数5％二氧化碳、2％氧气、93％氮气的环境中(低氧培养条件下同)分别培养相应时间.活细胞工作站下观察各组细胞在3h内的运动范围,计算细胞曲线运动速度及直线运动速度.(2)取对数生长期HaCaT细胞分为正常对照组以及低氧1、3、6、9、12、24 h组,每组20孔,后6组细胞分别行相应时间低氧培养.采用细胞计数试剂盒与酶标仪检测细胞增殖情况(以吸光度值表示).(3)取对数生长期HaCaT细胞分为正常对照组以及低氧1、3、6、24 h组,每组5孔,后4组细胞分别行相应时间低氧培养.蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白水平.对数据行单因素方差分析、Dunnett-t检验. 结果 (1)与正常对照组比较,低氧1、3、6h组细胞的运动范围明显增大,低氧培养时间越长,增加幅度越大.低氧1、3、6h组细胞在观察1、2、3h的曲线运动速度分别为(43±18)、(44±17)、(43±16) μm/h,(44±16)、(44±14)、(45±14) μm/h,(55±19)、(54±17)、(56±18) μm/h,显著高于正常对照组的(33±13)、(33±12)、(33±10) μm/h(t值为2.840～9.330,P＜0.05或P＜0.01);低氧6h组细胞曲线运动速度显著高于低氧1、3 h组(t值为3.474～ 4.545,P＜0.05或P＜0.01).各组内各观察时相点间细胞曲线运动速度相近(F值为0.012～0.195,P值大于0.05).低氧1h组观察1h细胞直线运动速度为(22±11) μm/h,显著高于正常对照组的(15±10)μm/h(t=2.697,P＜0.01);观察1、2、3h,低氧3、6 h组细胞直线运动速度分别为(19±14)、(12±8)、(10±6)μm/h,(32±19)、(21±13)、(17±12) μm/h,显著高于正常对照组”观察2、3h分别为(9±7)、(6±5) μm/h,t值为1.990 ～8.231,P＜0.05或P＜0.01”;低氧6h组细胞直线运动速度显著高于低氧1、3h组(t值为3.394～6.008,P＜0.05或P＜0.01).与观察1h比较,各组观察2、3h细胞直线运动速度均显著降低(t值为-8.208 ～-4.232,P值均小于0.01);正常对照组观察2、3h细胞直线运动速度差异明显(t=-1.967,P＜0.05).(2)正常对照组以及低氧1、3、6、9、12、24 h组细胞增殖水平分别为1.11±0.08、1.36±0.10、1.39±0.05、1.38±0.05、1.10±0.14、1.06±0.09、0.99±0.06(F=39.19,P＜0.01).与正常对照组比较,低氧1、3、6h组细胞增殖水平显著升高(t值分别为6.639、7.403、7.195,P值均小于0.01),低氧24 h组细胞的增殖水平显著降低(t=-3.136,P＜0.05);与低氧1、3、6h组比较,低氧9、12、24 h组细胞的增殖水平均显著降低(t值为-10.538～-6.775,P值均小于0.01).(3)正常对照组以及低氧1、3、6、24 h组细胞PCNA蛋白水平分别为0.93±0.12、0.97±0.14、1.62±0.18、0.95±0.09、0.66±0.21(F=20.11,P＜0.01).与正常对照组比较,低氧1、3、6h组细胞PCNA蛋白水平显著升高(t值分别为2.339、5.783、2.235,P＜0.05或P＜0.01),低氧24 h组细胞PCNA蛋白水平显著降低(t=-1.998,P＜0.05).低氧3h组细胞PCNA蛋白水平显著高于低氧1、6h组(￡值分别为4.312、3.947,P值均小于0.01),该3组细胞PCNA蛋白水平均显著高于低氧24 h组(￡值分别为2.011、6.193、3.287,P＜0.05或P＜0.01).结论 短时(1、3、6h)低氧处理可对HaCaT细胞的运动及增殖发挥促进作用,处理6h后细胞运动能力提高幅度最大,处理3、6 h对细胞增殖能力的促进作用更明湿.

关键词：缺氧、细胞运动、细胞增殖、HaCaT细胞

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资助基金：国家重点基础研究发展计划2012CB518101

在线出版日期：2014-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：231-236